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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321245 | β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒(比色法) | 100管/48樣 |
AS6321245 | β半乳糖苷酶(βGAL)測試盒(比色法) | 50管/24樣 |
測定意義:
β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解,此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲存的能量,還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,釋放自由的半乳糖。
測定原理:
β-GAL分解對-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算β-GAL活性。
自備用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體13mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
3、培養(yǎng)液等液體樣本:直接檢測
測定步驟:
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定(在EP管或96孔板中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
試劑一 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 10 | 10 |
迅速混勻,放入37℃保溫30min
試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻, 400nm處測定吸光值A(chǔ),計算ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管。
β-GAL活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.00585x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=39.89×(ΔA+0.0027) ÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.08×(ΔA +0.0027)
(4)按液體體積計算:
單位的定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027)÷0.00585×V反總]÷V樣÷T
=39.89×(ΔA+0.0027)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.0039x -0.0027;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA+0.0027) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/g鮮重)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=59.83×(ΔA+0.0027) ÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:
單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/104cell) =[(ΔA+0.0027) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.12×(ΔA +0.0027)
(4)按液體體積計算:
單位的定義:每mL樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol對-硝基苯定義為一個酶活性單位。
β-GAL活性(nmol/min/mL)=[(ΔA+0.0027)÷0.0039×V反總]÷V樣÷T
=59.83×(ΔA+0.0027)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬;T:反應(yīng)時間,30min。
公司正在出售的產(chǎn)品:
AHA ELISA Kit | Cullin3蛋白ELISA試劑盒 |
Apolipoprotein B(APOB)ELISA Kit | Frataxin蛋白ELISA試劑盒 |
EJ抗體/抗甘氨酰tRNA合成mei抗體ELISA試劑盒 | ICOS配體ELISA試劑盒 |
G蛋白偶聯(lián)受體78ELISA試劑盒 | NAP關(guān)聯(lián)蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠血管緊張su原(aGT)試劑盒 ELISA | 大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA檢測試劑盒 |
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人結(jié)腸癌抗原(CCA)檢測試劑盒elisa | K-乙酰轉(zhuǎn)移mei5ELISA試劑盒 |
人中性內(nèi)肽mei/腦啡肽mei(NEP)ELISA試劑盒 | 紫蘇子染料法PCR鑒定試劑盒 |
莢膜阿耶羅菌PCR試劑盒 | 施氏油脂線蟲PCR檢測試劑盒 |
唾液彎曲桿菌PCR試劑盒 | 人腺病毒G52型PCR試劑盒 |
隱襲腐霉PCR檢測試劑盒 | 莢膜組織胞漿菌莢膜變種PCR試劑盒 |
阪崎腸桿菌PCR試劑盒 | APC 大鼠活化蛋白CELISA檢測試劑盒 |
cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)ELISA試劑盒 | 莢膜阿耶羅菌PCR試劑盒 |
CAM 植物鈣調(diào)suELISA檢測試劑盒 | 蛇形毛圓線蟲PCR檢測試劑盒 |
血紅蛋白ζ(HBζ)ELISA試劑盒 | C7 人補體7ELISA檢測試劑盒 |