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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321258 | N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)試盒 | 100管/48樣 |
AS6321258 | N乙酰βD葡萄糖苷酶(NAG)測(cè)試盒 | 50管/24樣 |
測(cè)定意義:
NAG是溶酶體中的一種酸性水解酶,廣泛存在于各種組織、體液和細(xì)胞中,以前列腺和腎近曲小管細(xì)胞內(nèi)含量最高。NAG活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
NAG分解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷生成對(duì)-硝基苯,后者在400nm有最大吸收峰,通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算NAG活性。
自備用品:
酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水,充分溶解備用;用不完的試劑仍-20℃保存。
試劑二:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體13mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟:
酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定(在EP管或96孔板中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
試劑一 | 25 | |
蒸餾水 | 25 | |
試劑二 | 35 | 35 |
樣本 | 10 | 10 |
迅速混勻,放入37℃保溫30min
試劑三 | 130 | 130 |
充分混勻, 400nm處測(cè)定吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
NAG活性計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.00585x +0.0083;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)NAG活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷V樣÷T =39.89×(ΔA-0.0083)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中NAG活力的計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=39.89×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.00585×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.08×(ΔA-0.0083)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn);T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0039x +0.0083;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)NAG活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活力(nmol /min/mL)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷V樣÷T =59.83×(ΔA-0.0083)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中NAG活力的計(jì)算
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/mg prot)=[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活性(nmol/min/g鮮重)= [(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=59.83×(ΔA-0.0083)÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol對(duì)-硝基苯定義為一個(gè)酶活性單位。
NAG活性(nmol/min /104cell) =[(ΔA-0.0083) ÷0.0039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總)÷T
=0.12×(ΔA-0.0083)
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.07mL;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500萬(wàn);T:反應(yīng)時(shí)間,30min。
公司正在出售的產(chǎn)品:
MEPE ELISA Kit纖維素 | CytospinB蛋白ELISA試劑盒 |
Apolipoprotein L6(APOL6)ELISA Kit | GDP解離抑制因子2ELISA試劑盒 |
Ets變異體3ELISA試劑盒 | Isthmin2蛋白ELISA試劑盒 |
Hephaestin蛋白ELISA試劑盒 | Neurobeachin蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉su輔因子(VWF)試劑盒 ELISA | 大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit |
前梯度蛋白2ELISA試劑盒 | 人氧還原蛋白過(guò)氧化物mei4(PRDX4)試劑盒ELISA |
人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA檢測(cè)試劑盒 | L-天冬氨suan脫氫meiELISA試劑盒 |
人整合suαM型(ITG αM/CD11b) ELISA試劑盒 | 制草烏染料法PCR鑒定試劑盒 |
甲型流感病毒N1亞型(IAV-N1)核suan檢測(cè)試劑盒 | 蛇形隱孢子蟲(chóng)PCR試劑盒 |
沿岸單孢子蟲(chóng)PCR試劑盒 | 人腺病毒D93型PCR試劑盒 |
赤點(diǎn)石斑魚(yú)神經(jīng)壞死病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 甲型流感()病毒H3N2亞型 RT-PCR試劑盒 |
腸道病毒EV/柯薩奇病毒A型聯(lián)PCR檢測(cè)試劑盒 | IL1Ra 大鼠白介su1受體拮抗劑ELISA檢測(cè)試劑盒 |
cath-K 大鼠組織蛋白KELISA檢測(cè)試劑盒 | 甲型流感()病毒通用RT-PCR試劑盒 |
Casp-3 大鼠胱天蛋白3ELISA檢測(cè)試劑盒 | 山羊附紅細(xì)胞體PCR試劑盒 |
血管抑su結(jié)合蛋白(AMOT)ELISA試劑盒 | Calmin蛋白(CLMN)ELISA試劑盒 |