本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321246 | 幾丁質(zhì)酶測(cè)試盒(比色法) | 100管/48樣 |
AS6321246 | 幾丁質(zhì)酶測(cè)試盒(比色法) | 50管/24樣 |
測(cè)定意義:
幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動(dòng)物的外殼與軟體動(dòng)物的器官(例如烏賊的軟骨),以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解,具有抵御真菌侵染的作用,成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。
測(cè)定原理:
幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖,進(jìn)一步與對(duì)二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物,在585nm處有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(土壤樣品專用)和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體105mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體5mL×1瓶,4℃保存。(若出現(xiàn)結(jié)晶,可80℃左右加熱溶解后使用)
試劑三:液體5mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體10mL×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提?。?/p>
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。
真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心20min,取上清置于冰上待測(cè)。
培養(yǎng)液:直接測(cè)定。
測(cè)定操作表:
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
粗酶液(µL) | 80 | 80 |
提取液(µL) | 120 | 40 |
試劑一(µL) | 80 | |
混勻,37℃水浴1h | ||
試劑二(µL) | 40 | 40 |
混勻,沸水浴7min,5000rpm,4℃,離心10min,取上清200µL。 | ||
試劑三(µL) | 40 | 40 |
試劑四(µL) | 80 | 80 |
混勻,37℃,15min,于微量石英比色皿/96孔板,測(cè)定A585,ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。 |
計(jì)算公式:
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.3088-0.003,R2=0.9995
計(jì)算公式:
按照樣本重量計(jì)算
酶活性定義:37℃條件下,每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h/g鮮重)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=8.096×(ΔA +0.003)÷W
按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 8.096×(ΔA +0.003)÷Cpr
按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=8.096×(ΔA +0.003)÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷V樣=8.096×(ΔA +0.003)
V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.4mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.1544x-0.003,R2=0.9995
計(jì)算公式:
按照樣本重量計(jì)算
酶活性定義:37℃條件下,每克組織每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活性單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h/g鮮重)=(ΔA+0.003)÷0.1544×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=16.192×(ΔA +0.003)÷W
按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每毫克蛋白每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h mg prot)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T
= 16.192×(ΔA +0.003)÷Cpr
按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h /104 cell)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)
=16.192×(ΔA +0.003)÷細(xì)胞數(shù)量
4、按液體體積計(jì)算
酶活定義:37℃條件下,每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活單位。
幾丁質(zhì)酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.003)÷0.3088×V反總÷V樣=16.192×(ΔA +0.003)
V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.4mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL
注意事項(xiàng):
反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。
試劑四有一定的毒性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
公司正在出售的產(chǎn)品:
DNM2 ELISA Kit | Cullin4A蛋白ELISA試劑盒 |
Apolipoprotein B100(APOB100)ELISA Kit | Fritz蛋白ELISA試劑盒 |
Embigin蛋白ELISA試劑盒 | IgA-Fc斷片受體ELISA試劑盒 |
G蛋白偶聯(lián)受體家族C5組成員AELISA試劑盒 | Nebulette蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠血管緊張su轉(zhuǎn)化mei(ACE)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 大鼠基質(zhì)金屬蛋白mei1(MMP-1) ELISA Kit |
膜聯(lián)蛋白A7ELISA試劑盒 | 人胰高血糖su樣肽2(GLP2)檢測(cè)試劑盒elisa |
人H-rasELISA試劑盒 | L-2-羥戊二suan脫氫meiELISA試劑盒 |
人中性粒細(xì)胞顆??贵w(ANGA)試劑盒ELISA | 紫蘇葉染料法PCR鑒定試劑盒 |
莢膜組織胞漿菌PCR檢測(cè)試劑盒 | 施馬倫貝格病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
空腸彎曲桿菌PCR試劑盒 | 人腺病毒F亞屬PCR試劑盒 |
同禽腺病毒型鵪鶉支氣管炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 莢膜組織胞漿菌莢膜變種PCR試劑盒 |
阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因間序列(bp)常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒 | HL 大鼠肝脂ELISA檢測(cè)試劑盒 |
CaN 人鈣調(diào)磷suanELISA檢測(cè)試劑盒 | 莢膜組織胞漿菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
CAM-ab 人抗鈣調(diào)su特異抗體ELISA檢測(cè)試劑盒 | 傷PCR檢測(cè)試劑盒 |
血紅蛋白ε1(HBε1)ELISA試劑盒 | CⅠCP 大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽ELISA檢測(cè)試劑盒 |