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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321260 | 內(nèi)切β1,4葡聚糖酶(Cx)測(cè)試盒 | 100管/48樣 |
AS6321260 | 內(nèi)切β1,4葡聚糖酶(Cx)測(cè)試盒 | 50管/24樣 |
測(cè)定意義:
Cx(EC3.2.1.4)存在于細(xì)菌、真菌和動(dòng)物體內(nèi),是纖維素酶系的組份之一,Cx主要作用于非晶態(tài)纖維素和水溶性纖維素衍生物,隨機(jī)水解糖苷鍵,將其分解成葡萄糖、纖維二糖、纖維三糖和其他寡聚體。
測(cè)定原理:
采用3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定Cx催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品:
酶標(biāo)儀/可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體6mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體25mL×1瓶,4℃保存;
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟:
分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表(在EP管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 10 | 10 |
試劑一 | 100 | |
蒸餾水 | 100 |
混勻,37℃準(zhǔn)確水浴2h
試劑二 | 200 | 200 |
混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,測(cè)540nm下吸光值A(chǔ),計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。
Cx活性計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 6.4078x - 0.0673;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)Cx活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷V樣÷T
=14.305×(ΔA+0.0673)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中Cx活力的計(jì)算
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=14.305×(ΔA+0.0673) ÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V反總]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T
=0.0286×(ΔA+0.0673)
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL; V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,120 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 3.2039x - 0.0673;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、血清(漿)Cx活力的計(jì)算
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min/mL)= [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷V樣÷T
=28.61×(ΔA+0.0673)
3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中Cx活力的計(jì)算
(1)按照蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min/mg prot)=[ [1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(V樣×Cpr) ÷T
=28.61×(ΔA+0.0673) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T
=28.61×(ΔA+0.0673) ÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。
Cx活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷3.2039×V反總]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T
=0.057×(ΔA+0.0673)
1000:1mg/mL=1000ug/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL; V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,120 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
公司正在出售的產(chǎn)品:
FP-S ELISA Kit | C-型凝集su域家族11成員AELISA試劑盒 |
Apoptogenic 1(APOPT1)ELISA Kit | GLI家族鋅指蛋白1ELISA試劑盒 |
Fas凋亡抑制分子3ELISA試劑盒 | Janus激mei1ELISA試劑盒 |
HIV-1 | Neurotrimin蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠血紅su氧合mei2(HO-2)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 大鼠甲基化mei(Methylase)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
抗基底節(jié)ELISA試劑盒 | 人胺腺嘌呤二核苷suan(NAD)試劑盒ELISA |
人去唾液suan糖蛋白受體(AGSPR)檢測(cè)試劑盒elisa | Malectin蛋白ELISA試劑盒 |
人整合suα2(ITGA2)ELISA試劑盒 | 澤蘭染料法PCR鑒定試劑盒 |
甲型流感病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 | 傷PCR試劑盒 |
禽肺病毒RT-PCR試劑盒 | 人腺病毒D90型PCR試劑盒 |
呼吸道合胞病毒型PCR檢測(cè)試劑盒 | 甲型流感()病毒H5N1亞型 RT-PCR試劑盒 |
出血性大腸桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 | androgen 大鼠雄激suELISA檢測(cè)試劑盒 |
Cav-1 人窖蛋白Caveolin1ELISA檢測(cè)試劑盒 | 甲型流感病毒HN亞型(IAV-HN)核suan檢測(cè)試劑盒 |
Casp-9 大鼠胱天蛋白9ELISA檢測(cè)試劑盒 | 山羊痘病毒PCR試劑盒 |
血管性血友病因子裂解(ADAMTS-13/vWF-cp)ELISA試劑盒 | CAM 人鈣調(diào)suELISA檢測(cè)試劑盒 |