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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321253 | 葡萄糖脫氫酶(GCDH)測(cè)試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS6321253 | 葡萄糖脫氫酶(GCDH)測(cè)試盒(比色法) | 50管/48樣 |
測(cè)定意義:
GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H,大量存在于高等動(dòng)物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖生產(chǎn)中使用GCDH,不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量,而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結(jié)合生成的葡萄糖酸是一種理
想的補(bǔ)鈣制劑。因而,GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。
測(cè)定原理:
GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH,在340nm下測(cè)定NADH上升速率,即可反映GCDH活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體19 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;
樣本的前處理:
組織的前處理:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟:
分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零;
工作液的配制:臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用;用不完的試劑4℃可保存一周;
將工作液置于37℃預(yù)熱5分鐘。
在1mL石英比色皿中加入10μL樣本和190μL工作液,立即混勻,記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A2-A1。
GCDH活性計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3215×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=6.43×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=6430×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
GCDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=12.86×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.05cm;V樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Dyn ELISA Kit | CXC趨化因子受體1ELISA試劑盒 |
Apolipoprotein E(APOE)ELISA Kit | GasderminB蛋白ELISA試劑盒 |
Epiprofin蛋白ELISA試劑盒 | Igγ3鏈C區(qū)ELISA試劑盒 |
G抗原5ELISA試劑盒 | Nesprin3蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106) ELISA Kit | 大鼠基質(zhì)金屬蛋白mei7(MMP-7)ELISA試劑盒 |
Anoctamin4蛋白ELISA試劑盒 | 人胰島su樣生長(zhǎng)因子2 mRNA結(jié)合蛋白2(IGF2BP2)ELISA試劑盒 |
人腫瘤相關(guān)抗原(TAA)試劑盒ELISA | Limkainβ1蛋白ELISA試劑盒 |
人脂聯(lián)su受體2(ADIPOR2)檢測(cè)試劑盒elisa | 梔子染料法PCR鑒定試劑盒 |
甲型肝炎病毒(HAV)核suan檢測(cè)試劑盒 | 生孢梭菌(生孢梭狀芽孢桿菌)PCR試劑盒 |
槍狀肝吸蟲PCR試劑盒 | 人腺病毒D亞屬PCR試劑盒 |
有輪瑞氏絳蟲PCR檢測(cè)試劑盒 | 甲型副傷PCR試劑盒 |
布魯氏菌PCR試劑盒 | DAT 大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒 |
Casp-3 小鼠胱天蛋白3ELISA檢測(cè)試劑盒 | 甲型H1N1(2009)/季節(jié)性H3亞型/乙型BV系/BY系流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
cAMP和cAMP抑制cGMP 3',5'循環(huán)磷suan二酯10A(PDE10A)ELISA試劑盒 | 山羊皰疹病毒通用PCR試劑盒 |
血紅蛋白α2(HBα2)ELISA試劑盒 | CA242人 癌標(biāo)志物CA242ELISA試劑盒 |