一、細(xì)胞簡介:
細(xì)胞名稱:人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株
平臺編號:zl-057068
規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息:Mcf-7/adr
細(xì)胞特性
1)來源:乳腺癌
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣貼壁生長
3)含量:>1x10e6個/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
二、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
注意:培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的,待細(xì)胞長到70-80%匯合度時,去掉培養(yǎng)液,加含500ng/ml阿霉素藥物的培養(yǎng)液,放入培養(yǎng)箱,這段時間會有少部分細(xì)胞懸浮起來,屬于正常情況,通過換液可以去掉,等細(xì)胞長滿就可以消化傳代了,這時可以一直用含藥物培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞,兩代之后就可以將藥物濃度提高到1000ng/ml,細(xì)胞凍存時不要在培養(yǎng)基中加藥物。
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;北美胎牛血清(UnitedStates,GIBCO,貨號16000-044),10%,添加2mML-GLU,添加1uMAdr。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
三.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
智立中特(武漢)生物科技有限公司是一家集生物研發(fā),生產(chǎn),銷售,售后為一體的*產(chǎn)業(yè)公司。擁有載體質(zhì)粒,載體,國內(nèi)外微生物菌種資源,感受態(tài)細(xì)胞,培養(yǎng)基,細(xì)胞株等廣泛的生產(chǎn)銷售線。
質(zhì)粒載體產(chǎn)品:
提供各種類型載體宿主,基因種屬類型,抗性,設(shè)計并構(gòu)建質(zhì)粒:大腸桿菌表達(dá)載體;哺乳動物表達(dá)載體;酵母表達(dá)載體;昆蟲表達(dá)載體;植物表達(dá)載體;廣;腺病毒載體...常用有pACYC184;pACYCDuet-1;pASK-IBA5plus+FUS(人基因);pAX01;pBABE-Puro;pBAD24
pBI121;pBIFC-bFosVC155;pBIFC-VC15;pCDFDuet-1;pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro;pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro;pBIFC-VN155(I152L)addgene27097;pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro;pCAGGS;pBiFC-VN173(Plasmid#22010);pBlueScriptSK(+);pBlueScriptIISK(+);pBV220;pCas;pCas9
pBR322;pBT3-STE;pBudCE4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒RP4;pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP;pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
質(zhì)粒菌種產(chǎn)品:
E.coliNissle1917;USA300:大腸桿菌JM108;希瓦氏菌屬MR-1;E.coliW3110野生型;釀酒酵母W303a;釀酒酵母invsc1;釀酒酵母BY4741;釀酒酵母BY4742;畢赤酵母SMD1168H;PseudomonasputidaKT2440;E.coliMC1061;枯草芽孢桿菌WB800;根癌農(nóng)桿菌EHA105;根癌農(nóng)桿菌GV3101;CEN.PK2-1D;CEN.PK2-1C;全耐藥鮑曼不動桿菌;哈維弧菌BB170
菌種產(chǎn)品:
提供模式菌種,科研菌種,普通菌種等菌種資源,有證質(zhì)控樣品等微生物標(biāo)準(zhǔn)品,芽孢懸液。常用藥典菌種如:大腸埃希氏菌CMCC(B)44102、黑曲霉CMCC(F)98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501,銅綠假單胞菌CMCC(B)10104,生孢梭菌CMCC(B)64941;常用益生菌:長雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum),嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus),鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus),類干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei),干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei);常用真菌:松口蘑Tricholomamatsutake,灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea;靈芝,香菇,茯苓等
原代細(xì)胞和細(xì)胞系產(chǎn)品:
現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分:不同來源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細(xì)胞有:氣管上皮細(xì)胞;前列腺上皮細(xì)胞;膀胱上皮細(xì)胞;輸尿管上皮細(xì)胞;腎足細(xì)胞;內(nèi)皮祖細(xì)胞;輸卵管上皮細(xì)胞;乳腺上皮細(xì)胞
公司提供細(xì)胞系人源做過STR鑒定,其他做過種屬鑒定,確保產(chǎn)品無誤后方可提供客戶,形式凍存或復(fù)蘇節(jié)省客戶時間;確保實驗順利。常用細(xì)胞系有:WB-F344細(xì)胞;RG2[D74]細(xì)胞;NRK細(xì)胞;A7r5細(xì)胞;L6細(xì)胞;UMNSAH/DF-1細(xì)胞;MDBK(NBL-1)細(xì)胞;MDBK細(xì)胞;CCC-SMC-1細(xì)胞;PtK1(NBL-3)細(xì)胞;Mv1Lu細(xì)胞;Mv.1.Lu(NBL-7)細(xì)胞;F81細(xì)胞;CRFK細(xì)胞;MLTC-1細(xì)胞;MS1細(xì)胞;C3H/10T1/2,Clone8細(xì)胞;GL261細(xì)胞;P3X63Ag8.653細(xì)胞;HCC38細(xì)胞;ZR-75-30細(xì)胞;SK-LU-1細(xì)胞;NCI-H2087細(xì)胞;SK-N-MC細(xì)胞;Hs895.T細(xì)胞