人肝癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

　　一、細(xì)胞簡介：

　　細(xì)胞名稱：人肝癌細(xì)胞氟尿嘧啶耐藥株

　　平臺編號:zl-057120

　　規(guī)格:1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

　　細(xì)胞信息:Bel/Fu

　　該細(xì)胞為氟尿嘧啶處理的人肝癌耐藥細(xì)胞株。

　　細(xì)胞特性

　　1）來源：肝癌細(xì)胞

　　2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

　　3）含量：>1x106個(gè)/mL

　　4）污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

　　5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

　　細(xì)胞用途：僅供科研使用。

　　細(xì)胞培養(yǎng)步驟

　　一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　注意：客戶收到細(xì)胞后按照下面的要求操作：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細(xì)胞長到70-80%的匯合度時(shí)，去掉培養(yǎng)液，加入含8000ng/mlFU藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間肯定會有小部分細(xì)胞懸浮起來，但是不要緊，通過換液可以去掉，下面的細(xì)胞待長滿就可以消化傳瓶了，這時(shí)可以一直用含藥培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細(xì)胞，一兩代之后可以將藥物濃度提高15000ng/ml，含藥培養(yǎng)液用于細(xì)胞培養(yǎng)都沒問題的，凍存的時(shí)候就不要在凍存液里面加藥物了。

　　1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022，添加NaHCO31.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L,丙酮酸鈉0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%，添加1%雙抗，20000ng/ml氟尿嘧啶。

　　2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

　　二．細(xì)胞處理：

　　1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

　　3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

　　3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

　　智立中特（武漢）生物科技有限公司是一家集生物研發(fā)，生產(chǎn)，銷售，售后為一體的*產(chǎn)業(yè)公司。擁有載體質(zhì)粒，載體，國內(nèi)外微生物菌種資源，感受態(tài)細(xì)胞，培養(yǎng)基，細(xì)胞株等廣泛的生產(chǎn)銷售線。

　　質(zhì)粒載體產(chǎn)品：

　　提供各種類型載體宿主，基因種屬類型，抗性，設(shè)計(jì)并構(gòu)建質(zhì)粒：大腸桿菌表達(dá)載體；哺乳動物表達(dá)載體；酵母表達(dá)載體；昆蟲表達(dá)載體；植物表達(dá)載體；廣;腺病毒載體...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24

　　pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9

　　pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663

　　質(zhì)粒菌種產(chǎn)品：

　　E.coliNissle1917；USA300：大腸桿菌JM108；希瓦氏菌屬M(fèi)R-1；E.coliW3110野生型；釀酒酵母W303a；釀酒酵母invsc1；釀酒酵母BY4741；釀酒酵母BY4742；畢赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢桿菌WB800；根癌農(nóng)桿菌EHA105；根癌農(nóng)桿菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐藥鮑曼不動桿菌；哈維弧菌BB170

　　菌種產(chǎn)品：

　　提供模式菌種，科研菌種，普通菌種等菌種資源，有證質(zhì)控樣品等微生物標(biāo)準(zhǔn)品，芽孢懸液。常用藥典菌種如：大腸埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501,銅綠假單胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：長雙歧桿菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜熱鏈球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus），類干酪乳桿菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；靈芝，香菇，茯苓等

　　原代細(xì)胞和細(xì)胞系產(chǎn)品：

　　現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分：不同來源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細(xì)胞有：氣管上皮細(xì)胞；前列腺上皮細(xì)胞；膀胱上皮細(xì)胞；輸尿管上皮細(xì)胞；腎足細(xì)胞；內(nèi)皮祖細(xì)胞；輸卵管上皮細(xì)胞；乳腺上皮細(xì)胞

　　公司提供細(xì)胞系人源做過STR鑒定，其他做過種屬鑒定，確保產(chǎn)品無誤后方可提供客戶，形式凍存或復(fù)蘇節(jié)省客戶時(shí)間；確保實(shí)驗(yàn)順利。常用細(xì)胞系有：WB-F344細(xì)胞；RG2[D74]細(xì)胞；NRK細(xì)胞；A7r5細(xì)胞；L6細(xì)胞；UMNSAH/DF-1細(xì)胞；MDBK(NBL-1)細(xì)胞；MDBK細(xì)胞；CCC-SMC-1細(xì)胞；PtK1(NBL-3)細(xì)胞；Mv1Lu細(xì)胞；Mv.1.Lu(NBL-7)細(xì)胞；F81細(xì)胞；CRFK細(xì)胞；MLTC-1細(xì)胞；MS1細(xì)胞；C3H/10T1/2,Clone8細(xì)胞；GL261細(xì)胞；P3X63Ag8.653細(xì)胞；HCC38細(xì)胞；ZR-75-30細(xì)胞；SK-LU-1細(xì)胞；NCI-H2087細(xì)胞；SK-N-MC細(xì)胞；Hs895.T細(xì)胞