宮頸癌細(xì)胞
一、細(xì)胞簡(jiǎn)介:
細(xì)胞名稱:HeLa-S3宮頸癌細(xì)胞
平臺(tái)編號(hào):zl-056296
該細(xì)胞是1955年由PuckTT,MarcusPI和CieciuraSJ建系的,含HPV-18序列;角蛋白陽(yáng)性;可用于與染色體突變、細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)、集落形成相關(guān)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞的克隆分析。
細(xì)胞特性
1)來(lái)源:宮頸癌
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
3)含量:>1x106細(xì)胞數(shù)
4)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途:僅供科研使用。
二、細(xì)胞的培養(yǎng)
1)準(zhǔn)備F12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
三.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
四、運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
?。?)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與
?。?)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
智立中特(武漢)生物科技有限公司是一家集生物研發(fā),生產(chǎn),銷售,售后為一體的*產(chǎn)業(yè)公司。擁有載體質(zhì)粒,載體,國(guó)內(nèi)外微生物菌種資源,感受態(tài)細(xì)胞,培養(yǎng)基,細(xì)胞株等廣泛的生產(chǎn)銷售線。
質(zhì)粒載體產(chǎn)品:
提供各種類型載體宿主,基因種屬類型,抗性,設(shè)計(jì)并構(gòu)建質(zhì)粒:大腸桿菌表達(dá)載體;哺乳動(dòng)物表達(dá)載體;酵母表達(dá)載體;昆蟲表達(dá)載體;植物表達(dá)載體;廣;腺病毒載體...常用有pACYC184;pACYCDuet-1;pASK-IBA5plus+FUS(人基因);pAX01;pBABE-Puro;pBAD24
pBI121;pBIFC-bFosVC155;pBIFC-VC15;pCDFDuet-1;pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro;pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro;pBIFC-VN155(I152L)addgene27097;pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro;pCAGGS;pBiFC-VN173(Plasmid#22010);pBlueScriptSK(+);pBlueScriptIISK(+);pBV220;pCas;pCas9
pBR322;pBT3-STE;pBudCE4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒RP4;pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP;pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663
質(zhì)粒菌種產(chǎn)品:
E.coliNissle1917;USA300:大腸桿菌JM108;希瓦氏菌屬M(fèi)R-1;E.coliW3110野生型;釀酒酵母W303a;釀酒酵母invsc1;釀酒酵母BY4741;釀酒酵母BY4742;畢赤酵母SMD1168H;PseudomonasputidaKT2440;E.coliMC1061;枯草芽孢桿菌WB800;根癌農(nóng)桿菌EHA105;根癌農(nóng)桿菌GV3101;CEN.PK2-1D;CEN.PK2-1C;全耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌;哈維弧菌BB170
菌種產(chǎn)品:
提供模式菌種,科研菌種,普通菌種等菌種資源,有證質(zhì)控樣品等微生物標(biāo)準(zhǔn)品,芽孢懸液。常用藥典菌種如:大腸埃希氏菌CMCC(B)44102、黑曲霉CMCC(F)98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501,銅綠假單胞菌CMCC(B)10104,生孢梭菌CMCC(B)64941;常用益生菌:長(zhǎng)雙歧桿菌(Bifidobacteriumlongum),嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus),鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus),類干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei),干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei);常用真菌:松口蘑Tricholomamatsutake,灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea;靈芝,香菇,茯苓等
原代細(xì)胞和細(xì)胞系產(chǎn)品:
現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分:不同來(lái)源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細(xì)胞有:氣管上皮細(xì)胞;前列腺上皮細(xì)胞;膀胱上皮細(xì)胞;輸尿管上皮細(xì)胞;腎足細(xì)胞;內(nèi)皮祖細(xì)胞;輸卵管上皮細(xì)胞;乳腺上皮細(xì)胞
公司提供細(xì)胞系人源做過(guò)STR鑒定,其他做過(guò)種屬鑒定,確保產(chǎn)品無(wú)誤后方可提供客戶,形式凍存或復(fù)蘇節(jié)省客戶時(shí)間;確保實(shí)驗(yàn)順利。常用細(xì)胞系有:WB-F344細(xì)胞;RG2[D74]細(xì)胞;NRK細(xì)胞;A7r5細(xì)胞;L6細(xì)胞;UMNSAH/DF-1細(xì)胞;MDBK(NBL-1)細(xì)胞;MDBK細(xì)胞;CCC-SMC-1細(xì)胞;PtK1(NBL-3)細(xì)胞;Mv1Lu細(xì)胞;Mv.1.Lu(NBL-7)細(xì)胞;F81細(xì)胞;CRFK細(xì)胞;MLTC-1細(xì)胞;MS1細(xì)胞;C3H/10T1/2,Clone8細(xì)胞;GL261細(xì)胞;P3X63Ag8.653細(xì)胞;HCC38細(xì)胞;ZR-75-30細(xì)胞;SK-LU-1細(xì)胞;NCI-H2087細(xì)胞;SK-N-MC細(xì)胞;Hs895.T細(xì)胞