小鼠胚胎成纖維細胞

小鼠胚胎成纖維細胞

　一．小鼠胚胎成纖維細胞簡介：

　　細胞名稱：3T3-L1小鼠胚胎成纖維細胞

　　平臺編號:zl-056372

　　3T3-L1是從3T3細胞（Swissalbino）中經(jīng)克隆分離得到的連續(xù)傳代的亞系。該細胞從快速分裂到匯合和接觸性抑制狀態(tài)經(jīng)歷了前脂肪細胞到脂肪樣細胞的轉(zhuǎn)變。該細胞鼠痘病毒陰性；可產(chǎn)生甘油三酯，高濃度血清可增強細胞內(nèi)脂肪堆積。

　　細胞特性

　　1）來源：小鼠胚胎

　　2）形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長

　　3）含量：>1x106細胞數(shù)

　　4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

　　5)用途：僅供科研使用。

　　二．小鼠胚胎成纖維細胞的培養(yǎng)

　　1）準備DMEM培養(yǎng)基（含NaHCO31.5g/L，添加NaHCO31.5g/L)86%

　　小牛血清10%

　　GlutaMAX-1谷氨酰胺1%

　　MEMNEAA非必需氨基酸1%

　　SodiumPyruvate丙酮酸鈉1%

　　P/S青霉素-鏈霉素1%

　　2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

　　3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

　　注意事項：

　　1.該細胞起始接種密度應在3000/平方厘米，并且在細胞達到80%融合或者密度介于5萬-6萬/平方厘米時傳代，避免細胞*融合。

　　2.凍存復蘇后漂浮的細胞有可能是存活的，應通過溫和離心收集并繼續(xù)培養(yǎng)。

　　3.3T3-L1這樣具有脂滴的細胞培養(yǎng)過程中受到壓力的表現(xiàn)出現(xiàn)空泡現(xiàn)象時正常的，原因可能是培養(yǎng)基中缺乏谷氨酰胺、添加了抗真菌劑、CO2濃度較低對培養(yǎng)基中碳酸氫鈉的影響或者使用的血清品質(zhì)較低培養(yǎng)基的營養(yǎng)消耗殆盡。

　　4.該細胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養(yǎng)基中生長良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/LNaHCO3）培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞時需要提高CO2濃度（7%-10%）。

　　三、細胞處理

　　1）凍存細胞的復蘇：

　　將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

　　對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

　　3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

　　3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

　　四、運輸和保存

　　干冰運輸及復蘇好存活細胞

　?。?）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與質(zhì)粒載體網(wǎng)聯(lián)系。

　　（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

　　細胞接收后的處理

　　1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

　　2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

　　3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

　　4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。

　　智立中特（武漢）生物科技有限公司是一家集生物研發(fā)，生產(chǎn)，銷售，售后為一體的*產(chǎn)業(yè)公司。擁有載體質(zhì)粒，載體，國內(nèi)外微生物菌種資源，感受態(tài)細胞，培養(yǎng)基，細胞株等廣泛的生產(chǎn)銷售線。

　　質(zhì)粒載體產(chǎn)品：

　　提供各種類型載體宿主，基因種屬類型，抗性，設計并構(gòu)建質(zhì)粒：大腸桿菌表達載體；哺乳動物表達載體；酵母表達載體；昆蟲表達載體；植物表達載體；廣;腺病毒載體...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(人基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24

　　pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9

　　pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及結(jié)合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663

　　質(zhì)粒菌種產(chǎn)品：

　　E.coliNissle1917；USA300：大腸桿菌JM108；希瓦氏菌屬MR-1；E.coliW3110野生型；釀酒酵母W303a；釀酒酵母invsc1；釀酒酵母BY4741；釀酒酵母BY4742；畢赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢桿菌WB800；根癌農(nóng)桿菌EHA105；根癌農(nóng)桿菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐藥鮑曼不動桿菌；哈維弧菌BB170

　　菌種產(chǎn)品：

　　提供模式菌種，科研菌種，普通菌種等菌種資源，有證質(zhì)控樣品等微生物標準品，芽孢懸液。常用藥典菌種如：大腸埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501,銅綠假單胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：長雙歧桿菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜熱鏈球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳桿菌（Lactobacillusrhamnosus），類干酪乳桿菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；靈芝，香菇，茯苓等

　　原代細胞和細胞系產(chǎn)品：

　　現(xiàn)取不同組織現(xiàn)分：不同來源人/鼠/兔/豬等不同組織如肺、氣管、支氣管、甲狀腺、胰腺、垂體、腎上腺、扁桃體、胸腺、腎、膀胱、輸尿管、前列腺、心臟、血管。常用原代細胞有：氣管上皮細胞；前列腺上皮細胞；膀胱上皮細胞；輸尿管上皮細胞；腎足細胞；內(nèi)皮祖細胞；輸卵管上皮細胞；乳腺上皮細胞

　　公司提供細胞系人源做過STR鑒定，其他做過種屬鑒定，確保產(chǎn)品無誤后方可提供客戶，形式凍存或復蘇節(jié)省客戶時間；確保實驗順利。常用細胞系有：WB-F344細胞；RG2[D74]細胞；NRK細胞；A7r5細胞；L6細胞；UMNSAH/DF-1細胞；MDBK(NBL-1)細胞；MDBK細胞；CCC-SMC-1細胞；PtK1(NBL-3)細胞；Mv1Lu細胞；Mv.1.Lu(NBL-7)細胞；F81細胞；CRFK細胞；MLTC-1細胞；MS1細胞；C3H/10T1/2,Clone8細胞；GL261細胞；P3X63Ag8.653細胞；HCC38細胞；ZR-75-30細胞；SK-LU-1細胞；NCI-H2087細胞；SK-N-MC細胞；Hs895.T細胞