Pierce™ NHS-活化磁珠

Thermo Scientific Pierce NHS 活化磁珠可以通過(guò)簡(jiǎn)單的混合即用形式將蛋白質(zhì)與磁珠進(jìn)行共價(jià)、胺基偶聯(lián)，以便用于定制的親和純化實(shí)驗(yàn)。

NHS 活化磁珠的特點(diǎn)：

•高容量—與其他供應(yīng)商的 NHS 活化磁珠相比，結(jié)合能力至少高四 倍
• 易于使用—只需極少的手動(dòng)操作時(shí)間，即可在一步式反應(yīng)中固定化
• 安全—不需要有害化學(xué)品（如氰基和溴化氰）
• 配體兼容—可用于通過(guò)幾乎任何含有伯胺的化合物或親和配體進(jìn)行固定化
• 較低的非特異性結(jié)合—微珠表面被預(yù)封閉，任何非反應(yīng)的 NHS-酯基團(tuán)均被淬滅
• 方案兼容—微珠偶聯(lián)蛋白和下游應(yīng)用可通過(guò)手動(dòng)或自動(dòng)化（例如，Thermo Scientific KingFisher 儀器）方式執(zhí)行

活化的磁珠含有能與伯胺反應(yīng)以形成穩(wěn)定的酰胺鍵的 N-羥基-琥珀酰亞胺 (NHS) 功能基團(tuán)。一旦它們共價(jià)連接，固定的蛋白會(huì)對(duì)磁珠表面的浸出具有很高的耐受性。在實(shí)驗(yàn)中使用制備的磁珠時(shí)，非特異性結(jié)合可忽略不計(jì)，因?yàn)樵谂悸?lián)程序中，非反應(yīng) NHS-酯基團(tuán)被封閉。Pierce NHS 活化磁珠可通過(guò)手動(dòng)磁力架或自動(dòng)平臺(tái)（例如，Thermo Scientific KingFisher 儀器）進(jìn)行偶聯(lián)和處理。

應(yīng)用：
• 用于純化重組蛋白的配體固定化
• 抗體固定化，用于洗脫液中不含抗體污染的免疫沉淀和免疫共沉淀
• 利用腹水、血清和細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)抗體亞型進(jìn)行親和純化的二抗固定化

Pierce NHS 活化磁珠為任何所需蛋白質(zhì)偶聯(lián)到磁珠表面提供了一種便利的方式。這一過(guò)程不需要危險(xiǎn)化學(xué)品或冗長(zhǎng)的反應(yīng)方案。磁珠首先與蛋白在 pH 7 到 9 的無(wú)胺緩沖液中孵育 1 到 2 小時(shí)，以通過(guò) NHS-酯化學(xué)進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)。隨后磁珠被洗滌，任何剩余的活性 NHS-酯基團(tuán)被淬滅。胺反應(yīng)性化學(xué)及后續(xù)的淬滅可在 3 至 4 小時(shí)內(nèi)完成。偶聯(lián)蛋白不會(huì)從磁珠表面浸出。此外，由于有效淬滅和包被基底微粒表面的專(zhuān)有封閉試劑，磁珠表現(xiàn)出非常低的非特異性結(jié)合。偶聯(lián)后，制備的磁珠通常用于親和純化程序。