Detergent-Compatible Bradford Assay Kit
貨號:PD-Cde-1000
組分:1000毫升染色液一瓶,5 mg/ml BSA四支。
保存:4度避光,一年有效。-20度冷凍可長期保存。
在涉及蛋白組學(xué)的實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)常需要檢測溶液中的蛋白質(zhì)濃度。常用的蛋白定量的方法分為兩大類:一類是銅還原法,原理是在堿性環(huán)境中利用肽鍵將二價(jià)銅還原為一價(jià)銅,間接反映蛋白質(zhì)的數(shù)量,如雙縮脲反應(yīng)、改良Lowry法、BCA法等;另一類是染料結(jié)合法,原理是通過染料與蛋白質(zhì)的結(jié)合,使溶液的光吸收峰發(fā)生改變,從而反應(yīng)蛋白質(zhì)的數(shù)量,常用的染料是考馬斯亮藍(lán)G250(Bradford法),以及一些金屬-染料復(fù)合物,如兒茶酚-鉬酸復(fù)合物、鄰苯三酚紅-鉬酸復(fù)合物等。
在蛋白質(zhì)提取和蛋白電泳實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)常會用到還原劑和去垢劑(表面活性劑),上述蛋白定量方法往往與這些還原劑和去垢劑不兼容:還原劑對銅還原法有強(qiáng)烈干擾作用,即使在沒有蛋白的情況下也能產(chǎn)生顯色反應(yīng),無論是樣品本身含有的抗壞血酸,或是緩沖液中含有的巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)等,均能形成干擾;去垢劑則對染料結(jié)合法有強(qiáng)烈干擾作用,如SDS、Triton X100、Tween-20等,會與染料結(jié)合使溶液光吸收峰發(fā)生改變;高濃度的去垢劑也會對銅還原法產(chǎn)生干擾,但是在常用濃度下一般沒有影響。這些還原劑和去垢劑在蛋白提取緩沖液和電泳相關(guān)緩沖液中很常見,傳統(tǒng)上解決這些干擾的方法是通過蛋白沉淀法去除干擾成分,然后重懸蛋白進(jìn)行濃度測定,其缺點(diǎn)在于顯著增大了工作量,并且增加了實(shí)驗(yàn)誤差。
Bradford法不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,也不受還原劑的影響,但是去垢劑可以造成強(qiáng)烈干擾。通過與染料結(jié)合,去垢劑抬高背景光吸收值,使得檢測靈敏度和檢測范圍發(fā)生改變,甚至無法檢測。本產(chǎn)品通過對Bradford法的改進(jìn),降低去垢劑的干擾,可兼容6%SDS、4%Tween20、2% Triton-X100、2% NP40、8% CHAPS,可耐受各種RIPA裂解液,對蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的各種緩沖液均可兼容。
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞組織快速裂解液,根據(jù)其裂解液的強(qiáng)度大致可以分為強(qiáng)、中、弱三類。RIPA裂解液(強(qiáng))的主要去垢劑成分為1%Triton X-100,1% Sodium Deoxycholate,0.1% SDS;RIPA裂解液(中)的主要去垢劑成分為1% NP-40,0.5% Sodium Deoxycholate,0.1% SDS;RIPA裂解液(弱)的主要去垢劑成分為1% NP-40,0.25% Sodium Deoxycholate。即使樣品含兩倍濃度的RIPA裂解液(強(qiáng))或RIPA裂解液(中),本產(chǎn)品也可對BSA蛋白進(jìn)行濃度檢測,兩倍濃度的RIPA裂解液僅僅引起背景OD值升高約40%。
Bradford法蛋白定量的原理是在酸性環(huán)境中,蛋白質(zhì)結(jié)合考馬斯亮藍(lán)G250染料,導(dǎo)致染料的maximal光吸收峰發(fā)生位移,從紅棕色形式(maximal吸收峰 465nm)轉(zhuǎn)化為藍(lán)色形式(maximal吸收峰 610nm)。這兩種形式在 595nm 處光吸收差異maximal,因此 595nm 是測定考馬斯染料-蛋白復(fù)合物的藍(lán)色的best波長。由于G250染料在結(jié)合蛋白前后的光吸收波譜有重疊,直接使用OD595線性擬合,得到的是一個(gè)直徑很大的曲線,一般情況下可近似看作直線,在蛋白濃度跨度較大時(shí)會對線性擬合造成影響。使用OD595/OD470的比值則可以更好地?cái)M合反應(yīng)過程,得到的是一條直線,可提高檢測靈敏度。本試劑盒檢測BSA蛋白時(shí),線性擬合范圍可低達(dá)約30ug/ml,以檢測樣品體積5ul計(jì)算,即0.15ug的BSA蛋白;maximal檢測濃度可超過4 mg/ml。使用Bradford法蛋白定量時(shí),被檢測的肽或蛋白質(zhì)的分子量須大于 3KD,低于此分子量的短肽和氨基酸無法檢測。
去垢劑兼容型Bradford蛋白定量試劑盒能兼容去垢劑和還原劑,適用于各種常用蛋白緩沖液,性價(jià)比優(yōu)于BCA試劑盒。
相關(guān)產(chǎn)品:
極敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒,貨號:ECL-F-100,ECL-F-500
超敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒,貨號:ECL-P-100,ECL-P-500
BCA蛋白定量試劑盒,貨號:PD-Cog-1000
Bradford蛋白定量試劑盒,貨號:PD-Cde-1000