基因型
F- mcrA 0 (mcrBC-hsdRMS-mr) recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1 λ 0 (lac-proAB)
簡(jiǎn)要說(shuō)明
Stbl2菌株來(lái)源于JM109 E.coli strain,適合克隆不穩(wěn)定插入片段(正向重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒序列
等) ; marA 突變和mcrBC- hsdRMS-mrrdeletion使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時(shí)Stbl2
也可用于慢病毒載體的構(gòu)建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提
取。不存在lacIZ 0M15,不可用于藍(lán)、白斑篩選。AngYuBio High5TM系列Stbl2感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工
藝制作，經(jīng)pUC19檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)10°cfu/μg DNA。
C
操作說(shuō)明
1. AngYuBio Stbl2感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化( 或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速
插入冰中)，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
2.42°C水浴熱激45 秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入 0.9 mL室溫S.0.C.培養(yǎng)基或LB培養(yǎng)基(*使用s.0.C培養(yǎng)基，提高轉(zhuǎn)化效率)。
4.30°C, 225 rpm復(fù)蘇90分鐘。(當(dāng)質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片 段時(shí)，30C培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組的概率,
若轉(zhuǎn)化control PUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37C, 225 rpm復(fù)蘇60分鐘。)
5.5000rpm 離心- - 分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的s.0.C.
或LB培養(yǎng)基上。
6. 將平板倒置放于30°C培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。 (若轉(zhuǎn)化control PUC19計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，則需37°C培養(yǎng)過(guò)
夜) .
注意事項(xiàng)
1.感受態(tài) 細(xì)胞在冰上融化。
2.混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
4. S.0.C.或LB培養(yǎng)基均可使用，S.0.C.可提高轉(zhuǎn)化效率20%;實(shí)驗(yàn)人員可選擇在37C或30C培養(yǎng)細(xì)胞，
37C條件下，菌生長(zhǎng)速度加快，有利于提高質(zhì)粒產(chǎn)量，30C培養(yǎng)可降低錯(cuò)誤重組概率。
附: S.0.C. Medium配方
2% Tryptone
0.5% Yeast Extract
10 mM NaCI
2.5 mM KCI
10 mM MgCI2
10 mM MgSO4
20 mM glucose
NaOH調(diào)pH值至7.0
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