特點:
高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100;
操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
產(chǎn)品名稱 | 科研抗體 |
規(guī)格
| 詳見說明書 |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
樣品 DNA 的制備:
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 片段作為陽性對照。
2.標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
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使用及效果:
PCR反應特點
(1) 特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
反應五要素:
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
Phospho-YAP1(Ser127) 磷酸化原基因Yes相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1mlNOXA2/p67phox NADPH氧化酶活化蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml 2-羥-6-氯喹喔啉分子式:180.59英文名稱:2- hydroxy -6- dichloro quinoxalineCAS號:2427-71-6分子量: C8H5ClN2O
NT5C1A 胞質(zhì)5'核苷酸酶1A抗體 規(guī)格: 0.2ml Adenine 腺嘌呤 5g 瓶
PAPSS2 苷酸硫酸激酶2抗體 規(guī)格: 0.2ml 匹多莫德英文名稱:Pi do Maude分子式:244.27分子量: C9H12N2O4SCAS號:121808-62-6
BRLF1 立即早期基因BRLF1抗體(鼻咽基因) 0.2mlPhospho-HP1 gamma (Ser93) 磷酸化染色質(zhì)相關蛋白1-γ抗體 規(guī)格: 0.1ml Kanamycin mono sulfate 硫酸卡那霉素 25389-94-0 100mg
CXCR7/RDC1 細胞表面趨化因子受體7抗體 規(guī)格: 0.1ml 3,4,7,8-四甲-1,10-菲羅啉分子式:236.32英文名稱:3,4,7,8- four methyl -1,10-CAS號:1660-93-1分子量: C16H16N2
PDZK3 前列激活蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlBCMP11/AGR3 膜蛋白11抗體(前梯度同源蛋白2) 規(guī)格: 0.2ml DMEM (低) 10×1L 盒
Bolton肉湯配套試劑 規(guī)格: 10支/盒 用途: 每支添加于100mL的 Bolton 肉湯基礎中 5-喹啉分子式:145.16英文名稱:5-, the alcoholCAS號:578-67-6分子量: C9H7NO
小鼠腺英文名稱:EMT-6 硫酸喹啉分子式:227.24英文名稱:SulfateCAS號:54957-90-3分子量: C9H7·H2SO4N
CQ028 多基因下調(diào)蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Methyl Linoleate 亞油酸甲酯 112-63-0 100mg
白介素15(IL15)重組蛋白英文名稱:Recombinant Interleukin 15 (IL15) 1,3-二羥甲-5,5-二甲海因英文名稱:1,3- hydroxymethyl-2 -5,5- two methyl hydantoin分子式:188.18分子量: C7H12N2O4CAS號:6440-58-0
HAS1/Hyaluronan synthase 1 透明質(zhì)酸合成酶1抗體 規(guī)格: 0.1ml Papain 木瓜蛋白酶 25g 瓶
NETO1 腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml 3-氯-2-吡分子式:138.55英文名稱:3- chloro -2- cyanopyridineCAS號:38180-46-0分子量: C6H3ClN2
BAFF/CD257 TNF家族B細胞激活因子抗體 規(guī)格: 0.2ml 羊抗小鼠IgG-FITC 0.3ml 支
PLK1 絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶Plk1抗體 規(guī)格: 0.1ml 植物基因組DNA提取試劑盒 50T 盒
Phospho-TrkA (Tyr674/675)/TrkB (Tyr706/707) 磷酸化酪氨酸激酶A抗體 規(guī)格: 0.1mlFSP/Spastin 纖維母細胞表面蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml N-BOC-1,2,3,6-四氫吡分子式:183.25英文名稱:N-BOC-1,2,3,6- fourCAS號:85838-94-4分子量: C10H17NO2
Cadherin 10 鈣粘附分子10抗體 規(guī)格: 0.2ml 2,2-聯(lián)吡分子式:156.18英文名稱:2,2- UnionCAS號:366-18-7分子量: C10H8N2
科研抗體 白介素16(IL16)重組蛋白英文名稱:Recombinant Interleukin 16 (IL16) 4-甲硫酸氫氯酸嘧分子式:221.7英文名稱:4- methyl benzyl sulfateCAS號:4393-16-2分子量: C8H12ClNO2S
EIF2C1/Ago1 真核翻譯起始因子2C1抗體 規(guī)格: 0.2ml Physcion 大黃素甲 521-61-9 20mg
玻連蛋白(VTN)重組蛋白英文名稱:Recombinant Vitronectin (VTN) 重酸氫鉀分子式:389.91英文名稱:Potassium hydrogen carbonateCAS號:13455-24-8分子量: KHI2O6
Donkey Anti-Guinea pig IgG/FITC FITC標記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.3ml 過酸-雪夫(AB-PAS)染色試劑盒 6×50ml 盒
凝血因子Ⅱ(F2)重組蛋白英文名稱:Recombinant Coagulation Factor II (F2) 4-甲-3,5-二吡分子式:250.92英文名稱:4- methyl -3,5- dibromopyridineCAS號:3430-23-7分子量: C6H5Br2N
IDH1/Isocitrate dehydrogenase 異檸檬酸脫酶1抗體 規(guī)格: 0.2ml 纈沙坦英文名稱:Valsartan分子式:435.52分子量: C24H29N5O3CAS號:137862-53-4
ANKLE2 ANKLE2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml L-Carnitine inner salt 左旋肉堿 541-15-1 20mg
Smad2 細胞信號轉(zhuǎn)導分子Smad-2抗體 規(guī)格: 0.1mlPOT1 端粒保護蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml PCR板(半裙邊)(0.2ml) 96孔 塊