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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632163 | 銅藍(lán)蛋白(Cp)含量測(cè)試盒(比色法) | 100管/48樣 |
AS632163 | 銅藍(lán)蛋白(Cp)含量測(cè)試盒(比色法) | 50管/24樣 |
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
銅藍(lán)蛋白是血漿的含銅蛋白,有運(yùn)輸銅的功能,同時(shí)具有氧化酶的活性,是細(xì)胞外液重要的抗氧化劑。
測(cè)定原理:
銅藍(lán)蛋白催化3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍(lán)色產(chǎn)物,在645nm處有特征吸收峰,依此可得銅藍(lán)蛋白活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體7mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃避光保存。(使用前37℃預(yù)熱)
樣本前處理:
血清(漿)等液體樣本:直接檢測(cè)。
動(dòng)植物組織樣本:稱取約0.1g組織,加入1mL蒸餾水,進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表:
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至645nm,蒸餾水調(diào)零。
操作表
空白管 | 測(cè)定管 | |
樣品(µL) | 30 | 30 |
試劑一(µL) | 90 | 90 |
試劑二(µL) | 60 | |
混勻,37℃預(yù)熱5min | ||
試劑三(µL) | 120 | 120 |
混勻,37℃反應(yīng)30min | ||
試劑二(µL) | 60 | |
混勻,25℃室溫放置5min,取200µL于微量石英比色皿/96孔板中,測(cè)定645nm處吸光值。 ΔA=A測(cè)定-A空白。 |
計(jì)算公式:
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
按體積計(jì)算
酶活定義:37℃條件下, 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.01為一個(gè)酶活單位。
Cp活力(U/mL)=ΔA×V反總÷0.01÷V樣÷T = 33.33×ΔA
按鮮重計(jì)算
單位定義:37℃條件下,每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。
Cp活力(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷0.01÷(W×V樣÷V樣總)÷T = 33.33×ΔA÷W
按蛋白濃度計(jì)算
單位定義:37℃條件下,每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.01為一個(gè)酶活單位。
Cp活力(U/ mg prot)=ΔA×V反總÷0.01÷(Cpr×V樣)÷T = 33.33×ΔA÷Cpr
V樣:0.03 mL;V反總:0.3 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min;V樣總:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
按體積計(jì)算
酶活定義:37℃條件下, 每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高0.005為一個(gè)酶活單位。
Cp活力(U/mL)=ΔA×V反總÷0.005÷V樣÷T = 66.66×ΔA
按鮮重計(jì)算
單位定義:37℃條件下,每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。
Cp活力(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷0.005÷(W×V樣÷V樣總)÷T = 66.66×ΔA÷W
按蛋白濃度計(jì)算
單位定義:37℃條件下,每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高0.005為一個(gè)酶活單位。
Cp活力(U/ mg prot)=ΔA×V反總÷0.005÷(Cpr×V樣)÷T = 66.66×ΔA÷Cpr
V樣:0.03 mL;V反總:0.3 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min;V樣總:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g
注意事項(xiàng):
試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。
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