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貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321316 | 土壤β木糖苷酶( SβXYS)測試盒 | 100管/48樣 |
測定意義:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解的關鍵酶,產物木糖可作為碳源應用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應用于造紙工業(yè),比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應用價值。
測定原理:
S-β-XYS催化對硝基苯β-D-木糖苷產生對硝基苯,對硝基苯在405nm處有特征吸收峰,測定405nm光吸收增加速率,可計算S-β-XYS活性。
自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體1mL×1瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體10mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體10mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
約0.1g鮮土或風干土樣,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,室溫振蕩提取30min,然后10000g,4℃,離心10min,取上清待測。
測定操作表:
分光光度計/酶標儀預熱30min,調節(jié)波長至405nm。
操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 40 | 40 |
試劑一(μL) | 10 | |
試劑二(μL) | 80 | 70 |
混勻,45℃水浴20min | ||
試劑三(μL) | 80 | 80 |
混勻,靜置5min,405nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
β-木糖苷酶活性計算公式:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA。
酶活定義:每克土樣每天催化產生1μmol對硝基苯的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=16.33×(ΔA-0.0011)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL; W:樣品質量,g;T:反應時間,20min=1/72d;
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y=6.613x+0.0011,R2=0.9998;x為標準品濃度(μmol/mL),y為吸光值ΔA
酶活定義:每克土樣每天催化產生1μmol對硝基苯的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V反總÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=32.66×(ΔA-0.0011)÷W
V樣總:加入提取液體積,1mL; V反總:反應總體積,0.12mL;V樣:反應中樣品體積,0.04mL; W:樣品質量,g;T:反應時間,20min=1/72d;
ΔA控制在0.01-1范圍內,若ΔA大于1,可適當減小樣本量。
標準曲線線性范圍為:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
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