為幫助大家能更深入了解深層過濾，現(xiàn)已正式上線《深思熟“濾”》系列性深層過濾知識課堂，今天為大家?guī)肀鞠盗?strong>第四篇內容。
采用了深層過濾技術誕生的深層過濾器產(chǎn)品在生物醫(yī)藥行業(yè)有著普遍的應用，主要在于料液的澄清和除雜。
除上篇所講述的CHO細胞發(fā)酵生產(chǎn)單抗的應用之外，本篇還將講述LeClafine®的最新案例分享(1)及其他可應用的細胞類型介紹。
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實驗案例分享
1) 案例背景
客戶A利用昆蟲細胞進行豬圓環(huán)滅活疫苗的生產(chǎn)，料液下游純化工藝步驟如下：
?、?料液離心處理
?、?發(fā)酵液澄清過濾(一般采用深層過濾等方式)
?、?層析
?、?除菌
2) 挑戰(zhàn)點
由于深層前料液已經(jīng)過離心，因此濁度一般不高。與CHO細胞發(fā)酵液不同，其一般采用單級過濾。
目前客戶A離心后料液中蛋白濃度一般不高，因此在經(jīng)過深層過濾時應更注重在載量和蛋白回收率兩方面，其濾后濁度一般小于50NTU即可(各家要求不同，請區(qū)分看待)。
3) 測試結果
采用單級深層過濾的方式進行除雜澄清，第一次進行選型鑒定，第二次進行重復測試確定結果。本次以第二次重復測試結果作為展示。(2)
由上表可見，應用LeClafine®深層過濾器相關料液進行過濾，有較好的除雜效果，且在回收率和載量兩方面有較好的表現(xiàn)，可以滿足客戶的需求。
LeClafine®已應用的細胞類型一覽(下)
293細胞
293細胞是人上皮細胞系，常見的衍生株如HEK293、293T等，來源都是人胚胎腎細胞，較容易轉染，是一個常見的表達研究外源基因的細胞株。
BHK細胞
BHK細胞(Baby Hamster Syrian kidney),敘利亞幼地鼠腎細胞，常用的細胞為BHK-21，即BHK細胞系的亞克隆細胞系，C13。原始的細胞株是成纖維細胞，貼壁依賴性。1963年獲得單細胞克隆細胞。后經(jīng)無數(shù)次傳代后細胞可懸浮生長，廣泛用于增殖各種病毒，生產(chǎn)獸用疫苗。
口蹄疫疫苗多數(shù)用此細胞。
MDCK細胞
MDCK細胞(madin-darby canine kidney)細胞系是以馬丁達比犬腎上皮細胞為原型演變而來。因MDCK細胞與小腸上皮細胞生理特性類似，而常用于體外藥物吸收特性的研究，且MDCK細胞培養(yǎng)周期較短，可以更快速的用于抑制劑的篩選及底物的鑒定。
由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易變異，MDCK細胞系被認為適于甲、乙型流感病毒疫苗生產(chǎn)的3種細胞系之一。
禽流感病毒疫苗多數(shù)用此細胞。
Marc-145
猴胚胎腎上皮細胞是上皮樣細胞，來源于猴腎細胞，從母細胞(MA104細胞)克隆而得到，可連續(xù)傳代培養(yǎng)。Marc-145細胞主要用于病毒的培養(yǎng)，特別是豬繁殖與呼吸障礙綜合病毒(PRRSV)對此細胞尤為敏感。
豬藍耳病毒滅活疫苗多數(shù)用此細胞。
昆蟲細胞
可用昆蟲細胞發(fā)酵來進行豬圓環(huán)病毒滅活疫苗的生產(chǎn)。
大腸桿菌
培養(yǎng)大腸桿菌用于重組蛋白或質粒的生產(chǎn)。大腸桿菌培養(yǎng)周期短，較容易到達一個比較高的數(shù)量級。
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