為幫助大家能更深入了解深層過濾，現(xiàn)已正式上線《深思熟“濾”》系列性深層過濾知識課堂，今天為大家?guī)肀鞠盗械谌獌热荨?br />
在前幾期《深思熟“濾”》系列性深層過濾知識課堂中我們向大家介紹了深層過濾技術，歡迎點擊了解。
本文將圍繞在生物醫(yī)藥行業(yè)主要接觸的細胞類型以及深層過濾技術的應用展開，因內容較多，因此分為上下兩篇來具體闡述，本文為上篇。
深層過濾介質的內部有著復雜交錯的結構，所以可以將雜質攔截在內部網(wǎng)絡中，從而能去除細胞碎片而保留例如蛋白質等大分子物質等目的產(chǎn)物，故而深層過濾技術被廣泛用于疫苗、抗體、血液制品、重組蛋白、抗生素生產(chǎn)等。
| 深層過濾器在生物醫(yī)藥行業(yè)主要接觸的細胞類型
采用了深層過濾技術誕生的深層過濾器產(chǎn)品在生物醫(yī)藥行業(yè)有著普遍的應用，主要在于料液的澄清和除雜。
在抗體和疫苗行業(yè)(包含人用抗體和動物疫苗等)，主要為細胞發(fā)酵液的澄清，發(fā)酵后期的細胞處于衰變期，內部產(chǎn)生的目的蛋白已經(jīng)基本形成，細胞破碎釋放出目的蛋白并且產(chǎn)生大量細胞碎片，此時需要采用深層過濾器盡可能多的除去雜質(主要是HCPs和DNA)而盡可能多的保留目的蛋白(一般客戶要求過濾前后蛋白損失率低于10%)。
那么細胞發(fā)酵行業(yè)中應用深層濾器較多的細胞類型有哪些呢？上篇在此針對CHO細胞及293細胞展開：
CHO細胞
CHO(Chinese hamster ocary，中國倉鼠卵巢細胞)是細胞生物技術產(chǎn)業(yè)化的細胞系，目前70%以上的細胞治療性抗體蛋白都是由CHO細胞產(chǎn)生的。
批準正式應用于人類疾病治療或疾病預防的基因工程產(chǎn)品約有三十多種，其中只有一種(乙肝疫苗)是由酵母菌生產(chǎn)的，其余所有產(chǎn)品都是由CHO細胞和大腸桿菌生產(chǎn)的，大腸桿菌不能形成有活性的二聚體(如白介素2)，也不具有糖基化的功能(如EPO)，而CHO卻具有如上的功能，因此CHO成為表達復雜生物大分子的理想宿主。其中CHO-K1細胞系為其常用系，是野生型細胞系。
應用CHO細胞進行抗體發(fā)酵生產(chǎn)的好處主要在于：
?更適用于懸浮培養(yǎng)(也可進行貼壁生長)，可以滿足大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)重組蛋白的要求
?對蛋白質進行糖基化，其糖型與人類基本一致，更接近天然抗體分子
?不易傳播人類病毒，比其他哺乳細胞基因組更容易進行改造和拓增
?遺傳背景清楚、轉染效率高、可長期穩(wěn)定傳代并穩(wěn)定表達有功能活性抗體
?利于抗體純化：為成纖維細胞，非分泌型，本身很少分泌內源性蛋白
?可用無血清培養(yǎng)基進行培養(yǎng)
| 案例研究——兩步深層法除雜澄清料液
有一項目采用培養(yǎng)CHO-K1細胞作為宿主細胞來制備單克隆抗體。一般CHO-K1細胞發(fā)酵液內容物較為復雜(濁度一般大于2000NTU)，除目標產(chǎn)物外，還含有大量細胞碎片(如HCPs和DNA等)，一般采用離心后加一步深層或者兩步深層的方式進行除雜澄清。
我們采用兩步深層的方式除雜澄清，其料液其結果如下表：
由上表可見，應用LeClafine®對相關料液進行過濾，有較好的除雜效果，且回收率也滿足客戶需求。
表1：一級過濾數(shù)據(jù)圖表
表2：二級過濾數(shù)據(jù)圖表
*本次實驗數(shù)據(jù)僅供參考，如有測試需求請聯(lián)系樂純生物技術支持部門。
除CHO-K1細胞外。目前深層濾器LeClafine®在293細胞、BHK細胞、MDCK細胞等發(fā)酵液及大腸桿菌裂解液的除雜澄清過程中均有應用，將在后文中介紹。
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