當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化與抗氧化系列>> AS632183查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒(比色法)
產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
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級別 | 其他 |
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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632183 | 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒(比色法) | 100管/96樣 |
AS632183 | 查爾酮異構(gòu)酶(CHI)測試盒(比色法) | 50管/48樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase, CHI)是第一個被認(rèn)識的黃酮類化合物合成相關(guān)酶,也是黃酮代謝途徑中的關(guān)鍵酶之一。查爾酮異構(gòu)酶和查爾酮合酶一起構(gòu)成了黃酮類化合物生物合成的限速酶。
測定原理:
查爾酮異構(gòu)酶(CHI)催化查爾酮環(huán)化形成 4,5,7-三羥基黃烷酮,通過測定381nm下的吸光度變化表示CHI的活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;用時加入20mL試劑一充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存。
粗酶液提取:
按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至381nm,蒸餾水調(diào)零。
樣本測定表
在微量石英比色皿或96孔板中加入10µL上清液和190µL試劑二,立即混勻并記錄381nm下初始吸光值A(chǔ)1和37℃保溫30min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A2-A1。
CHI活性計算:
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每小時A381變化0.1為一個酶活力單位。
CHI(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每小時A381變化0.1為一個酶活力單位。
CHI(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.1÷T =400×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL; V樣:加入樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量。
用96孔板測定的計算公式如下
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每小時A381變化0.05為一個酶活力單位。
CHI(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.05÷T =800×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每小時A381變化0.05為一個酶活力單位。
CHI(U/g 鮮重)=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.05÷T =800×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL; V樣:加入樣本體積,0.01mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,0.5h;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量。
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