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當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化磷酸化系列>> AS012147海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒

海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒

參  考  價:1300 - 2200
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 型號

    AS012147

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質

    代理商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

100管/48樣 2200元 15盒可售

50管/48樣 1300元 15盒可售

更新時間:2023-10-15 19:28:14瀏覽次數(shù):7832次

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產(chǎn)地 國產(chǎn) 規(guī)格 100管/48樣、50管/24樣
級別 其他
海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒廣泛存 在于細菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、 無脊椎動物和高等植物等多種有機體 中。

本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

AS012147

海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒

100管/48樣

AS012147

海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)測試盒

50管/48樣

測定意義:海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α ,  α- 1- 1  糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖, 廣泛存  在于細菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、 無脊椎動物和高等植物等多種有機體 中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩(wěn)定性。另外, 它本身具有很強的吸水 性,使它在生物體內具有抗脫水作用,在逆境條件下可通過識別外界刺激、產(chǎn)生和傳遞信號、 基因表達和代謝調節(jié)來保護植物免受不良環(huán)境的傷害
。
植物體內主要以葡萄糖為底物合成海藻糖,該反應首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase ,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6- 磷酸葡萄糖反應生成中間產(chǎn)物6-磷酸海藻糖, 再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose6-phosphate phosphatase ,TPP)的作用下去磷酸化,生成海藻糖。因此,測定TPS活性對于研究植物逆境具有重要意義。
測定原理:
TPS 催化 UDPG 與 G6P 生成海藻糖-6-磷酸,同時產(chǎn)生 UDP;UDP 在丙酮酸激酶與乳 酸脫氫酶作用下,氧化 NADH 為 NAD+,NADH 的下降速率與 UDP 含量成正比,通過 340nm 吸光度下降速率反映 TPS 活性。
需自備的儀器和用品:
分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶, 4℃保存;
試劑一:粉劑×1 瓶, -20℃保存; 臨用前加入 10mL 試劑五溶解,用不完的試劑分裝后-20℃ 保存,禁止反復凍融;
試劑二:粉劑×2 瓶, -20℃保存;臨用前每瓶加入 25mL 試劑五溶解;現(xiàn)配現(xiàn)用;
試劑三:粉劑× 1 瓶, -20℃避光保存;臨用前加入 0.1mL 試劑五溶解,用不完的試劑分裝后 -20℃保存,禁止反復凍融;
試劑四:100μL×1 瓶, 4℃避光保存;臨用前低速離心,以防止試劑沾在管壁;

試劑五:液體 100mL× 1 瓶,4℃保存;
工作液的配制: 臨用前, 先配置好 1 瓶試劑二和試劑三, 然后在試劑二瓶中加入 25μL 試劑 三和 25μL 試劑四, 充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。
樣品測定的準備:
1、細菌或細胞的處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量 (104 個): 提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液), 超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復 30 次) ;8000g ,4℃離心 10min,取上清, 置冰上待測。
2、組織的處理: 按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液) ,冰浴中勻漿。 8000g  4℃離心 10min,取上清, 置冰上待測。 測定步驟

1 、在 EP 管中加入如下試劑

試劑名稱(μL)

測定管

樣本

150

試劑一

150

 

混勻, 30℃反應 20min ,95℃水浴 2min 滅活, 冷卻至室溫。10000g 4℃離心 5min,取上層 反應液待測。
2、工作液配制: 詳見試劑的組成和配制中工作液的配制。
3、在 1mL 玻璃比色皿中加入如下試劑

反應液

100

工作液

900

 

混勻,測定 340nm 下 5min 后吸光值 A1 與 10min 后吸光值 A2 ,ΔA=A1-A2。
TPS 活力計算:
1、按照蛋白濃度計算
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
TPS 活力(nmol/min/mg prot)=ΔA×V 反總÷  ( ε×d)×109÷(V 樣×Cpr)÷T×3
=643×ΔA ÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
單位的定義:每 g 組織每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
TPS 活力(nmol/min/g  鮮重)=ΔA×V 反總÷  ( ε×d)×109÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T×3
=643×ΔA÷W
3、按細菌或細胞密度計算
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化 1nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
TPS 活力(nmol/min/104  cell)=ΔA×V 反總÷  ( ε×d)×109÷(V 樣×細胞數(shù)量)÷T×3
= 1.28×ΔA
V  反總:反應體系總體積,1mL;ε:NADH 摩爾消光系數(shù), 6.22×103  L / mol /cm;d:比色 皿光徑, 1cm;V 樣:加入樣本體積, 0.15 mL;V 樣總:加入提取液體積, 1 mL;T:反應 時間, 5  min;3,稀釋倍數(shù);Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量;細胞數(shù)量, 500 萬。

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