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產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 級別 | 其他 |
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質(zhì)粒小量提取試劑盒 高純度質(zhì)粒試劑盒
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
高純質(zhì)粒小量快速提取試劑盒 | HRN0010 | 50T |
HRN0011 | 100T | |
HRN0012 | 200T |
產(chǎn)品描述
本試劑盒采用改進(jìn)SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞,離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,再通過去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.去蛋白液配方,可以高效去除殘留的核酸酶,即使是核酸酶含量豐富的菌株如JM系列、HB101也可以輕松去除。有效防止了質(zhì)粒被核酸酶降解。
3.快速、方便,不需要使用有毒的benfei、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、純度好, 可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
運(yùn)輸和保存方法
1)本試劑盒在室溫儲存12個(gè)月不影響使用效果。
2)RNase A保存在即用型甘油緩沖液中,常溫運(yùn)輸,收到后,不超過25℃室溫至少保存6個(gè)月,4℃保存12個(gè)月,長期保存放-20℃。
3)使用時(shí),將試劑盒所帶的全部RNase A加入溶液P1后(終濃度100ug/ml)置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活,提取的質(zhì)粒可能會有微量RNA殘留,在溶液P1中補(bǔ)加RNase A即可。
4)環(huán)境溫度低時(shí)溶液P2中SDS可能會析出渾濁或者沉淀,可在37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清,不要?jiǎng)×覔u晃,以免形成過量的泡沫。
5)避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
質(zhì)粒小量提取試劑盒 高純度質(zhì)粒試劑盒
注意事項(xiàng)
1.所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī),如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2.提取質(zhì)粒的量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。一般高拷貝質(zhì)粒,建議接種單菌落于 1.5-4.5 ml加合適抗生素的LB培養(yǎng)基, 過夜培養(yǎng)14-16個(gè)小時(shí),可提取出多達(dá)20µg的純凈質(zhì)粒。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒,應(yīng)適當(dāng)加大菌體使用量,使用5-10 ml過夜培養(yǎng)物,同時(shí)按比例增加P1、P2、P3的用量,其它步驟相同。
3.得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶,也可能為2條或者多條DNA條帶,這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動(dòng)位置不一造成,與提取物培養(yǎng)時(shí)間長短、提取時(shí)操作劇烈程度等有關(guān)。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過90%。
4.質(zhì)粒DNA確切分子大小, 必須酶切線性化后,對比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的的質(zhì)粒,泳動(dòng)位置不確定,無法通過電泳知道其確切大小。
5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,但應(yīng)該確保pH大于7.5,pH過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒應(yīng)該保存在-20℃。質(zhì)粒DNA如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
6.本產(chǎn)品僅作科研用途!
天津天正信達(dá)供應(yīng):RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進(jìn)樣瓶、培養(yǎng)基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實(shí)驗(yàn)耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)等專業(yè)人員的研發(fā)、構(gòu)建了儀器設(shè)備齊全的實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺,主要包括AKTA、高壓均質(zhì)機(jī)、全波長酶標(biāo)儀、高速落地離心機(jī)和qPCR儀等大型儀器設(shè)備。
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