HFL1人肺成纖維細胞
名稱 | HFL1 (人胚肺成纖維細胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | HFL-1; HFL 1; Human fetal lung fibroblast 1; HFL |
種屬 | 人類 |
年齡(性別) | 男性,胎兒 |
組織來源 | 肺 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | Ham's F-12K+10% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40?S+5%DMSO 溫度:液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
保藏機構(gòu) | ATCC; CCL-153 BCRC; 60299 ECACC; 89071902 |
二、細胞培養(yǎng)操作
1) 復蘇細胞:以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由 客戶自行承擔。
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。
4. 貼壁細胞可以消化,懸浮細胞直接混勻收集細胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注:運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議 1:2 傳代。
9. 注意: 1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。
公司正在出售的產(chǎn)品:
VK1 ELISA Kit | 犬附紅細胞體(犬嗜血支原體)PCR試劑盒 |
V-Myb Myeloblastosis Viral Oncogene Homolog(MYB)ELISA Kit | 腸致病性大腸桿菌PCR試劑盒 |
AAV ELISA Kit | 牛丘疹性口炎病毒PCR檢測試劑盒 |
Cyclin-D1 ELISA Kit | 雙歧桿菌屬通用PCR檢測試劑盒 |
HA ELISA Kit | 鼻疽伯克霍爾德氏菌PCR試劑盒 |
AcSDKP ELISA Kit | 豬鞭蟲PCR試劑盒 |
Hsp-40 ELISA Kit | 豬痢疾蛇形螺旋體(SH)核suan檢測試劑盒 |
Wolfram Syndrome Protein 1(WFS1)ELISA Kit | 棒桿菌通用PCR試劑盒 |
Actinin Alpha 2(ACTN2)ELISA Kit | 鮑肌肉癥病毒PCR檢測試劑盒 |
von Willebrand Factor,vWF ELISA Kit | 豬痢疾蛇形螺旋體(SH)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
PSA ELISA Kit | PGE1 小鼠前列腺suE1ELISA檢測試劑盒 |
vitamin B2,VB2 ELISA Kit | 5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒 |
Vomeronasal 1 Receptor 4(VN1R4)ELISA Kit | HFL1人肺成纖維細胞轉(zhuǎn)胺7(TGM7)ELISA試劑盒 |
Acid Phosphatase 5, Tartrate Resistant(ACP5)ELISA Kit | 60S核糖體蛋白L17(RPL17)ELISA試劑盒 |
A Disintegrin And Metalloproteinase With Thrombospondin 9(ADAMTS9)ELISA Kit | 70kDa熱休克蛋白1樣蛋白(HSPA1L)ELISA試劑盒 |