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貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632122 | 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒 | 100管/96樣 |
AS632122 | 6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒 | 50管/48樣 |
注意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,與能量的平衡、生長速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。
測定原理:
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm吸光度增加速率,計(jì)算6PGDH活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體19mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定操作:
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到340 nm。
2將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解;在37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴10min以上;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
3. 取96孔板,依次加入10μL樣本190μL試劑一,于340nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10 s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2?!鰽=A2-A1
注意:空白管只需要做一次。
計(jì)算公式:
使用96孔板測定的計(jì)算公式如下
1、血清(漿)6PGDH活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH(nmol/min/mL)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷V樣÷T=2143.6×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中6PGDH活力的計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=2143.6×ΔA÷W
(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
6PGDH(nmol/min /104 cell)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=1.072×ΔA
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:96孔板光徑,0.5cm;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,3 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;2000:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),2000萬。
公司正在出售的產(chǎn)品:
KGF ELISA Kit | 3-葡萄糖苷suan孕二醇ELISA試劑盒 |
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ⅩⅦ型膠原ELISA試劑盒 | B細(xì)胞連接蛋白ELISA試劑盒 |
AT豐富結(jié)合域1AELISA試劑盒 | Cullin4A蛋白ELISA試劑盒 |
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人淋巴毒suα(LTA)ELISA試劑盒 | CD147分子ELISA試劑盒 |
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ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)ELISA試劑盒 | 高致病性H7亞型病毒PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法) |
ATMA/TMAB 人抗甲狀腺微粒體抗體ELISA檢測試劑盒 | 微黃線蟲PCR試劑盒 |
胰腺再生蛋白Ⅳ(REG4)ELISA試劑盒 | ASP 人?;碳さ鞍譋LISA檢測試劑盒 |