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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS632143 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒 | 100管/96樣 |
AS632143 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測(cè)試盒 | 50管/48樣 |
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
測(cè)定原理：
MDHAR 催化 NADH 還原MDHA 生成 AsA和NAD+，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD+沒有。通過測(cè)定340 nm光吸收下降速率，來計(jì)算出MDHAR活性。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備：
研缽、冰、臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水
試劑組成和配置：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體20mL×1瓶，室溫保存。
試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃保存。臨用前加入3 mL蒸餾水充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解。
試劑五：液體15μL×1瓶，4℃保存。臨用前加3 mL試劑二充分溶解。
粗酶液提?。?/p>
組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；8000g ，4℃離心20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
MDHAR測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3.依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL試劑三、20μL試劑四、20μL試劑五和120μL試劑二，最后加入20μL上清液，迅速混勻后于340nm比色，記錄30s和150s的吸光值30s和150s的吸光值A(chǔ)1和A2，△A=A1-A2。
MDHAR活性計(jì)算公式：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（Cpr×V樣）÷T
= 804×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH 為1U。
MDHAR (nmol/min /g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 804×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
= 804×△A ÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫升液體每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε÷d×V反總×109÷V樣）÷T
= 804×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL=2×10-4L；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V樣總：提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；T：反應(yīng)時(shí)間，2min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下：
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /mg prot) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（Cpr×V樣）÷T
= 1608×△A ÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol NADH 為1U。
MDHAR (nmol/min /g 鮮重) = △A÷ε÷d×V反總×109]÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 1608×△A ÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V反總×109÷（細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T
= 1608×△A ÷ 細(xì)胞數(shù)量
（4）按液體體積計(jì)算
MDHAR活性單位定義：25℃中每毫升液體每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。
MDHAR (nmol/min /mL) = △A÷ε÷d×V反總×109÷V樣）÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6220 L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL=2×10-4L；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，20μL=0.02mL；V樣總：提取液體積，1 mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質(zhì)濃度需要另外測(cè)定，建議使用本公司蛋白質(zhì)含量BCA試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；T：反應(yīng)時(shí)間，2min。
注意事項(xiàng)：
臨用前配制的試劑未使用完的4℃保存，3天內(nèi)使用完。
公司正在出售的產(chǎn)品：
PDI ELISA Kit | 60S核糖體蛋白L17ELISA試劑盒 |
Anti-Filaggrin Antibody(AFA)ELISA Kit | Atlastin3蛋白ELISA試劑盒 |
alpha-1能受體ELISA試劑盒 | CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白δELISA試劑盒 |
B群鏈球菌多糖抗體ELISA試劑盒 | Dachsous2蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA) 試劑盒 ELISA | 大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA檢測(cè)試劑盒 |
5-羥色胺受體1AELISA試劑盒 | 雞三碘甲狀腺原氨suan(T3)試劑盒elisa |
人巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)檢測(cè)試劑盒elisa | Cereblon蛋白ELISA試劑盒 |
豬熱休克蛋白70(HSP-70)elisa試劑盒 | 藍(lán)舌病病毒1型RT-PCR試劑盒 |
庚型肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 蛙病毒PCR試劑盒 |
禽致病性大腸桿菌O1血清型PCR試劑盒 | 絲瓜絡(luò)探針法PCR鑒定試劑盒 |
莫佩亞病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 光滑念珠菌PCR試劑盒 |
鴨沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒 | SS 大鼠生長(zhǎng)抑suELISA檢測(cè)試劑盒 |
Aβ1-42 大鼠β淀粉樣蛋白1-42ELISA檢測(cè)試劑盒 | 弓形蟲PCR檢測(cè)試劑盒 |
AZT 人苷ELISA檢測(cè)試劑盒 | 兔種特異性基因PCR檢測(cè)試劑盒 |
胰島su樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP6)ELISA試劑盒 | ATP合8(ATP8)ELISA試劑盒 |
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