本網(wǎng)站銷(xiāo)售的所有產(chǎn)品均不得用于人類(lèi)或動(dòng)物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
AS6321153 | 順烏頭酸酶(ACO)測(cè)試盒（比色法） | 100管/96樣 |
AS6321153 | 順烏頭酸酶(ACO)測(cè)試盒（比色法） | 50管/50樣 |
測(cè)定意義
順烏頭酸酶（aconitase），三羧酸循環(huán)中的酶，催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕?。檸檬酸本身不易氧化，在順烏頭酸酶作用下，通過(guò)脫水與加水反應(yīng)，使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上，生成易于脫氫氧化的異檸檬酸，為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備。
測(cè)定原理
ACO催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸，異檸檬酸氧化脫羧將NAD+ 還原生成NADH，導(dǎo)致340nm處光吸收上升。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：100mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：20mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1.5mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：液體5mL×1瓶，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加1.5mL蒸餾水充分溶解；現(xiàn)配現(xiàn)用
試劑七：粉劑×1支，4°保存；臨用前加12mL試劑四充分溶解；
工作液：臨用前在12mL試劑七中加入1mL蒸餾水、1mL試劑四、1mL試劑五、1mL試劑六充分混勻
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
稱(chēng)取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
將勻漿轉(zhuǎn)入離心管內(nèi)600g，4℃離心5min。
棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定胞質(zhì)順烏頭酸酶活性。
在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體順烏頭酸酶活性測(cè)定。
測(cè)定步驟
分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
樣本測(cè)定
（1）將工作液，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min；現(xiàn)配現(xiàn)用；若分次用將工作液分裝后于-20°保存，一星期內(nèi)可用。
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入40μL樣本160μL工作液，混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和 3min20s后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
ACO活性計(jì)算
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣) ÷T=268×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=54×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.108×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.04 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，3min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
b.用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=536×ΔA÷Cpr
（2） 按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總)÷T=108×ΔA÷W
（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活性單位。
ACO活性（nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=0.216×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.04 mL；V樣總：加入提取液體積，0.202 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，3min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬(wàn)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
AFA ELISA Kit | B細(xì)胞連接蛋白ELISA試劑盒 |
anti-rubella virus IgG antibody，anti-RV IgG ELISA Kit | Cullin4B蛋白ELISA試劑盒 |
Claspin蛋白ELISA試劑盒 | Egl九同源物1ELISA試劑盒 |
Dickkopf | IgA-Fc斷片受體ELISA試劑盒 |
大鼠腎上腺髓質(zhì)su(ADM) ELISA檢測(cè)試劑盒 | 大鼠酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒 |
胍基丁胺脲水解mei/凝集meiELISA試劑盒 | 人中性?xún)?nèi)肽mei/腦啡肽mei(NEP)ELISA試劑盒 |
人E選擇su(E-Selectin/CD62E)試劑盒elisa | F-肌動(dòng)蛋白ELISA試劑盒 |
雞白血病病毒抗原(ALV-AG)ELISA檢測(cè)試劑盒 | 禽病毒性關(guān)節(jié)炎RT-PCR試劑盒 |
回歸熱疏螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒 | 絲狀支原體絲狀亞種型PCR試劑盒 |
伯氏立克次氏體(柯克斯體)PCR試劑盒 | 山豆根探針?lè)?/span>PCR鑒定試劑盒 |
細(xì)小病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 黃頭桿狀病毒RT-PCR試劑盒 |
米氏旋毛蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 | CIAP 大鼠牛小腸堿性磷suanELISA檢測(cè)試劑盒 |
B群鏈球菌多糖抗體(IgG)ELISA試劑盒 | 黃頭桿狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA試劑盒 | 水泡性口炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
血小板衍生生長(zhǎng)因子CC(PDGF-CC)ELISA試劑盒 | BP180-Ab 人抗BP180抗體ELISA檢測(cè)試劑盒 |
采購(gòu)中心
