本網(wǎng)站銷售的所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
AS6321174 | 堿性蛋白酶測試盒(比色法) | 100管/48樣 |
AS6321174 | 堿性蛋白酶測試盒(比色法) | 50管/24樣 |
測定意義:
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,屬于絲氨蛋白酶。此外,該酶還能夠水解酯鍵、酰胺鍵,具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一,廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢、食品、制革等行業(yè)。
測定原理:
在堿性條件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨;在堿性條件下,酪氨還原磷鉬酸生成鎢藍(lán);鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰,測定680nm吸光度增加速率,來計算AKP活性。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加5mL蒸餾水溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入10mL試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發(fā),一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現(xiàn)顆粒物不溶物不影響使用)。
試劑四:粉劑×1瓶, 4℃保存。臨用前加20mL蒸餾水溶解。
試劑五:液體5mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,0.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨溶液,4℃保存。
粗酶液提?。?/p>
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
血清或培養(yǎng)液:直接測定。
細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
測定操作:
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到680 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.試劑二、試劑三和試劑四置于40℃水浴保溫30min。
3. 對照管:取0.5 mL EP管,加入20 μL粗酶液,40 μL試劑二,混勻后置于40℃水浴保溫10min;加入40μL試劑三,混勻后8000g ,4℃離心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A對照管。
4. 測定管:取0.5 mL EP管,加入20μL粗酶液,40μL試劑三,混勻后置于40℃水浴保溫10min;加入40μL試劑二,混勻后8000g,4℃離心10min;取40μL上清液,加入新的EP管,再加入200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A測定管。(注意與空白管不同,先加試劑三,后加試劑二)
5. 空白管:取0.5 mL EP管,加入40μL蒸餾水,200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A空白管。
6. 標(biāo)準(zhǔn)管:取0.5 mL EP管,加入40μL標(biāo)準(zhǔn)品,200μL試劑四,40μL試劑五,混勻后置于40℃水浴保溫20min,吸取200μL于680nm測定光吸收,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。
計算公式:
1. 按照樣本蛋白濃度計算
AKP活性單位定義:30℃每毫克蛋白每分鐘水解產(chǎn)生1nmol酪氨為1個酶活單位。
AKP活性(nmol/min /mg prot)= C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷(Cpr×V1)÷T= 125×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷Cpr
2.按照樣本質(zhì)量計算
AKP活性單位定義:30℃每克樣品每分鐘催化水解產(chǎn)生1 nmol酪氨為1個酶活單位。
AKP活性(nmol/min /g鮮重)=C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷(W×V1÷V2)÷T= 125×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷W
3. 按照液體體積計算
AKP活性單位定義:30℃每毫升樣品每分鐘催化水解產(chǎn)生1nmol酪氨為1個酶活單位。
AKP活性(nmol/min/mL)=C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷V1÷T= 125×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)
按照細(xì)胞數(shù)量計算
AKP活性單位定義:30℃每104個細(xì)胞每分鐘催化水解產(chǎn)生1nmol酪氨為1個酶活單位。
AKP活性(nmol/min /104 cell)=C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V1÷V2)÷T= 125×(A測定管-A對照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)÷細(xì)胞數(shù)量
C標(biāo)準(zhǔn)品:0.25 μ mol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪氨溶液;V反總:酶促反應(yīng)總體積,0.1mL;Cpr:粗酶液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL);V1:加入反應(yīng)體系中粗酶液體積(mL),0.02 mL;V2:提取液總體積(mL),1mL;T:催化反應(yīng)時間(min),10min;W:樣品質(zhì)量(g)。
注意事項:
臨用前配制的試劑配置好后3天內(nèi)使用完畢。
公司正在出售的產(chǎn)品:
BCR ELISA Kit | cAMP和cAMP抑制cGMP |
anti-SSA/Ro antibody ELISA Kit | C-型凝集su域家族4成員KELISA試劑盒 |
C-Raf原癌基因絲蘇氨suan蛋白激meiELISA試劑盒 | Fas凋亡抑制分子3ELISA試劑盒 |
EB病毒ELISA試劑盒 | Juxtanodin蛋白ELISA試劑盒 |
大鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒 ELISA | 大鼠多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(DAT)ELISA Kit |
醛脫氫mei3家族成員A1ELISA試劑盒 | 人整合suA5(ITGA5)試劑盒ELISA |
人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)檢測試劑盒elisa | Gremlin-1蛋白ELISA試劑盒 |
雞流行性乙型腦炎抗體IgG(JEIgG)elisa試劑盒 | 產(chǎn)紫青霉PCR試劑盒 |
霍亂弧菌CTX基因PCR檢測試劑盒 | 水牛泰勒蟲PCR檢測試劑盒 |
鮑肌肉癥病毒PCR試劑盒 | 三日瘧原蟲PCR試劑盒 |
純綠青霉PCR檢測試劑盒 | 火雞源性成分PCR試劑盒 |
透明毛圓線蟲PCR檢測試劑盒 | FFA 大鼠游離脂肪suanELISA檢測試劑盒 |
B-細(xì)胞淋巴瘤因子9(Bcl9)ELISA試劑盒 | 霍亂弧菌O(VC O)核suan檢測試劑盒 |
B-細(xì)胞激活因子(BAFF)ELISA試劑盒 | 雙??刹《?/span>PCR檢測試劑盒 |
血小板親和蛋白3(PKP3)ELISA試劑盒 | B-黑色su瘤抗原3(BAGE3)ELISA試劑盒 |