血鋅濃度測(cè)試盒（比色法）

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測(cè)定意義：

鋅是必需的微量元素之一，在胰島素和卟啉代謝中也起重要作用。

測(cè)定原理：

在pH 8.5~9.5的溶液中，Zn2+與鋅試劑生成藍(lán)色配位化合物，在620nm有最大吸收峰。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水和無水乙醇。

試劑組成和配制：

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體15mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前1天配制，加入15mL無水乙醇充分溶解，蓋緊，過夜待用。4℃保存可穩(wěn)定約1個(gè)月，如顏色變黃，則已失效。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1支，10 μ mol/L Zn2+標(biāo)準(zhǔn)液。4℃保存。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液解凍：提前取出標(biāo)準(zhǔn)液，置于室溫下充分解凍后混勻。

3. 空白管：取1.5 mL EP管，依次加入100 μL蒸餾水，100μL試劑一，混勻；室溫，13000g，離心10min，小心吸取上清液100 μL，加入0.5 mL EP管，加入100μL試劑二，100μL試劑三，充分混勻后13000g離心取上清，吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板，620 nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1.5 mL EP管，依次加入100 μL標(biāo)準(zhǔn)液，100 μL試劑一，混勻；室溫，13000g，離心10min，小心吸取上清液100 μL，加入0.5 mL EP管，加入100μL試劑二，100μL試劑三，充分混勻后13000g離心取上清，吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板，620 nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測(cè)定管：取1.5 mL EP管，依次加入100 μL血清，200 μL試劑一，混勻；室溫，8000g，離心10min，小心吸取上清液100 μL，加入0.5 mL EP管，加入100μL試劑二，100μL試劑三，充分混勻后13000g離心取上清，吸取200μL于微量石英比色皿/96孔板，620 nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。

血鋅濃度計(jì)算公式：

血鋅濃度（μ mol/ L）=C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

= 10×(A測(cè)定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

C標(biāo)準(zhǔn)液：10 μ mol/L Zn2+

注意事項(xiàng)：

1. 試劑三需提前一天配制，如變黃色則不能再使用。

2. 加入試劑三混勻后，要在30 min內(nèi)完成該管測(cè)定。

3. 檢出限為1μ mol/L。

血鋅濃度檢測(cè)試劑盒配方（微量法 100T/96S）

試劑一：取20 mL試劑瓶，加入20mL甲醇。

試劑二：稱0.2g氫氧化鈉溶于50mL蒸餾水 充分溶解后取21.4mL于50mL試劑瓶中，

        取30mL試劑瓶，稱0.32g硼酸、0.373g氯化溶于25mL蒸餾水，充分溶解后將其全部倒入上述21.4mL氫氧化鈉溶液內(nèi)混勻，取出15mL于15mL試劑瓶?jī)?nèi)，即為試劑二，其余的留著以后用。

試劑三：取10 mL棕色試劑瓶，加入12mg鋅試劑

標(biāo)準(zhǔn)液：稱取1 mg氧化鋅（81.39MW），加10 μ L濃鹽酸，10 μ L蒸餾水，充分溶解；加12.267 mL蒸餾水，混勻；取EP管，加入10 μ L上述溶液，加入990 μ L蒸餾水，混勻，即10 μ mol/L Zn2+標(biāo)準(zhǔn)液。

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