Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I

　　產(chǎn)品信息

　　產(chǎn)品名稱產(chǎn)品編號(hào)規(guī)格儲(chǔ)存                                      價(jià)格(元)

　　Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白I HRX104010mg4℃  586.00

　　Collagen, Type I , from rat tail 鼠尾膠原蛋白 I HRX104150mg4℃  2236.00

　　產(chǎn)品描述

　　膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟器官外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布最為廣泛。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型，I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成300nm長(zhǎng)的異源多聚體。當(dāng)用作凝膠時(shí)，膠原蛋白有助于體外培養(yǎng)并增強(qiáng)細(xì)胞特異性形態(tài)和功能的表達(dá)。膠原蛋白也可用于薄層以促進(jìn)附著，應(yīng)用包括研究腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移，單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)或分化研究，以及粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的放射自顯影研究。膠原I還用于維持肝細(xì)胞功能，分化狀態(tài)和肝細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄水平的升高等研究。

　　本品是來源于鼠尾，溶于無菌0.006M HAc溶液，濃度為5mg/mL，通過SDS-PAGE測(cè)定純度大于90%，無菌。

　　運(yùn)輸和保存方法

　　冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期1年。不可凍存。

　　注意事項(xiàng)

　　1)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

　　2)整個(gè)操作請(qǐng)于冰上進(jìn)行，因室溫下膠原蛋白I可迅速成膠。

　　3)整個(gè)操作請(qǐng)?jiān)跓o菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

　　4)本產(chǎn)品僅作科研用途!

　　使用說明

　　1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被，推薦濃度：1-5μg/cm2，以包被2μg/cm2為例：

　　1)用無菌0.006M HAc溶液將膠原蛋白I稀釋到0.012mg/mL,按下表加入相應(yīng)的體積

　　培養(yǎng)皿類別表面積(每孔/每皿，cm2)加入0.012mg/mL膠原的體積(μL)

　　96孔培養(yǎng)板0.3 50

　　24孔培養(yǎng)板1.9 300

　　12孔培養(yǎng)板3.8 600

　　6孔培養(yǎng)板9.5 1580

　　35mm培養(yǎng)皿8 1330

　　60mm培養(yǎng)皿21 3500

　　100mm培養(yǎng)皿55 9170

　　2)確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干。也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS反復(fù)洗滌3-4次后直接使用。包被好的器皿在4-25℃溫度下至少可以保存3個(gè)月以上。

　　2、三維膠原的制備：

　　1)鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/mL以上，pH7左右時(shí)，可形成有一定強(qiáng)度的三維膠，成膠濃度1-2mg/mL。先用膠原蛋白溶解于0.006M的HAc溶液中，在成膠過程中需要加入0.06倍體積的0.1M氫氧化鈉來中和。

　　2)需要準(zhǔn)備的溶液(所有溶液均需無菌和預(yù)冷)：10×PBS(可含有10mg/L的酚紅用來指示pH)或10×培養(yǎng)液、0.1M NaOH。

　　3)鼠尾膠原蛋白I在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過程中要盡量保持低溫。

　　A)不含細(xì)胞的三維膠原的制備，以配制1mL，1mg/mL三維膠為例;

　　1.將200μL鼠尾膠原蛋白I(5mg/ml)加入冰浴處理的離心管中，加入 690μL H2O

　　2.加入12μL 0.1M NaOH中(順序不能顛倒，即不可將NaOH溶液加入到膠原蛋白中，否則會(huì)因?yàn)镹aOH溶液不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))，立即混勻。

　　3.加入100μL 10×PBS或者10×培養(yǎng)液，混勻后立即加入到培養(yǎng)器皿中(混勻后的pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)量)。

　　4.將培養(yǎng)器皿在室溫(約25℃)放置20min，待膠凝固后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中(如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。)

　　B)含細(xì)胞的三維膠原的制備，以配制1mL，1mg/mL三維膠為例;

　　1.準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。

　　2.將200μL鼠尾膠原蛋白I(5mg/ml)加入到12μL 0.1M NaOH中(順序不能顛倒，即不可將NaOH溶液加入到膠原蛋白中，否則會(huì)因?yàn)镹aOH溶液不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))，立即混勻。

　　3.加入23μL的10×PBS或者10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后的pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)量)。

　　4.加入760μL的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。

　　5.將培養(yǎng)器皿在室溫(約25℃)放置20min，待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

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