重組蛋白 A 瓊脂糖的特點(diǎn):
•固定化蛋白 A – 特異性結(jié)合多種哺乳動(dòng)物物種的 IgG,尤其是大多數(shù)人和兔 IgG 亞型
• 標(biāo)準(zhǔn)容量 – 固定化蛋白 A 上樣可提供 15 至 17 mg 人 IgG/毫升樹脂的結(jié)合容量
• 瓊脂糖樹脂 – 適用于小型色譜柱或批次親和純化方法的交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖
Pierce 重組蛋白 A 瓊脂糖使用基因工程化蛋白 A 形式,后者產(chǎn)自大腸桿菌然后固定在交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B) 上。雖然已去除一些非必需區(qū)域,但重組體在總體大小和 IgG 結(jié)合結(jié)構(gòu)域方面與天然蛋白 A 相似。該蛋白具有四個(gè)高親和力結(jié)合位點(diǎn),能夠特異性結(jié)合多個(gè)物種的免疫球蛋白分子的 Fc 區(qū)。
重組蛋白 A 產(chǎn)自大腸桿菌且功能與的天然蛋白 A 基本相同。蛋白 A 分子包含四個(gè)高親和力 (Ka= 10^8/mol) 結(jié)合位點(diǎn),能夠與包括人和兔在內(nèi)的多個(gè)物種的 IgG Fc 區(qū)相互作用
一些研究人員更傾向于使用基于蛋白 A 重組形式的親和樹脂,特別是在實(shí)際經(jīng)驗(yàn)表明不同生產(chǎn)來源(大腸桿菌與)所引起的非特異性結(jié)合較低或內(nèi)毒素污染水平較低的應(yīng)用中。另一方面,天然蛋白 A 樹脂通常提供更高容量的抗體純化。
交聯(lián) 6% 微珠狀瓊脂糖 (CL-6B) 的特性:
•支持 pH 值穩(wěn)定性:2 至 14(短期);3 至 13(長(zhǎng)期)
•平均粒徑:45 至 165微米
•排阻極限:10,000 至 4,000,000 道爾頓
•體積流速:約 1 mL/分鐘(對(duì)于 1 cm 直徑柱)
•線性速度:30 cm/h
• 壓力:低于 25 psi (1.5 bar);定義為樹脂可承受的跨色譜柱壓降(注:液相色譜裝置的指示表壓可能測(cè)量的是總系統(tǒng)壓力,而不是跨色譜柱壓降。)
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