Tali™ 細(xì)胞周期試劑盒提供了一個(gè)簡(jiǎn)單的工作流程:
• 預(yù)混合試劑可在室溫下儲(chǔ)存并在細(xì)胞準(zhǔn)備就緒時(shí)使用
• 只需固定細(xì)胞,加入試劑,孵育細(xì)胞并進(jìn)行可視化
• 細(xì)胞周期數(shù)據(jù)可以在 Tali™ 儀器上分析或者導(dǎo)出為 .csv 或 .fcs 文件,以便使用不同的建模軟件進(jìn)行分析
作為細(xì)胞周期階段指示器的細(xì)胞 DNA 的熒光檢測(cè)
PI(一種紅色熒光染料)通過嵌入堿基間與 DNA 結(jié)合,幾乎無序列偏好。因此,熒光強(qiáng)度與細(xì)胞 DNA 量成正比,該量本身就是細(xì)胞周期階段的指標(biāo)(隨著通過細(xì)胞周期發(fā)生細(xì)胞進(jìn)程,DNA 量最終翻倍)。PI 也會(huì)標(biāo)記 RNA,因此,添加 RNase A 對(duì)于精確測(cè)定細(xì)胞周期每個(gè)階段的細(xì)胞百分比是必要的。
固定細(xì)胞后,只需添加優(yōu)化 Tali™ 細(xì)胞周期試劑,在暗環(huán)境中孵育30分鐘,然后在 Tali™ 成像型細(xì)胞分析儀上分析??稍趦x器上分析來自 Tali™ 成像型細(xì)胞分析儀的細(xì)胞周期數(shù)據(jù),或者以 .csv 或 .fcs 格式導(dǎo)出,并使用細(xì)胞周期建模軟件(如 ModFit 或 MultiCycle)進(jìn)行分析。