X-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)試劑是一種 β-半乳糖苷酶的發(fā)色底物,可產(chǎn)生藍(lán)色沉淀物,可溶于 DMF,并且可用于檢測含 β-半乳糖苷酶基因的載體、質(zhì)?;?DNA 片段。
IPTG(異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷)可用于盡量增加表達(dá)載體中的基因表達(dá)。當(dāng)用抗體篩選 λ 噬菌體庫時(shí),通過防止融合蛋白的表達(dá)直至建立菌斑塊,可以提升成功概率。將含誘導(dǎo)劑 IPTG 的硝酸纖維素過濾柱置于平板上,并在 37°C 下持續(xù)生長,3 至 4 小時(shí)菌斑塊生長后,可誘導(dǎo)潛在 β-半乳糖苷酶-cDNA 融合蛋白的表達(dá)。然后用抗體篩選硝酸纖維素過濾柱。IPTG 也可與 X-Gal 聯(lián)用來檢測活性 β-半乳糖苷酶,并且適用于使用噬菌體 M13 和 Igt11 載體的實(shí)際應(yīng)用。
IPTG 的特點(diǎn):
•X-Gal 產(chǎn)生深藍(lán)色沉淀物,以檢測 β-半乳糖苷酶表達(dá)
• 可與 IPTG 聯(lián)用選擇性地盡量增加 β-半乳糖苷酶的檢測