紅四唑
紅四唑
2,3,5-氯化三苯基四氮唑,又稱四唑紅,簡稱TTC,TTZ,或TPTZ,一種脂溶性光敏感復(fù)合物,即可用來檢測種子的生存能力,也可用來檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。檢測機(jī)制在于TTC本身可作為一種氧化還原指示劑,活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶(尤其是線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶)可以將TTC還原為紅色甲臢化合物TPF(1,3,5-triphenylformazan)。對于種子或者植物組織來說,染色結(jié)果為活組織被染成不同程度的紅色,死組織或者無生命力的組織不著色。對于缺血梗塞組織,因組織壞死脫氫酶活力喪失呈現(xiàn)蒼白色,而正常組織呈深紅色。
染色方法
1.1 染色工作液的配制
TTC通常用磷酸緩沖鹽溶液來配制,pH范圍為6.5-7.5之間,常用的工作濃度為2%,也可用1%或者更低的濃度,根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系調(diào)整。
可使用以下的緩沖鹽體系配制:
1)取9.078g KH2PO4(Mw:136.09)溶于1L去離子水內(nèi),制備成66.7mM KH2PO4儲存液;取9.472g Na2HPO4·H2O(Mw:137.99)溶于1L去離子水內(nèi),制備成68.6mM Na2HPO4儲存液;將兩份KH2PO4儲存液與1份Na2HPO4儲存液充分混合,即得到需要的磷酸緩沖液溶液。
2)根據(jù)需要的TTC工作液濃度來制備,如加入2g TTC粉末到100ml混合的磷酸鹽緩沖液中,即得到2%的染色工作液。此時(shí)的溶液pH值在6.5-7.5之間。此工作液可裝到不透明的白色瓶或者棕色瓶子內(nèi),4℃保存幾個(gè)月穩(wěn)定。
【注意:TTC染色液的緩沖體系可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣來調(diào)整;也可用去離子水來溶解配置成10mg/ml的儲存液,過濾除菌,建議此法染色液當(dāng)天使用?!?br />1.2 染色方法(動物組織)
1)取新鮮組織切片放到裝有TTC染色液的染色容器內(nèi),37℃避光孵育15-30min,邊孵育邊觀察顏色變化;【注意:TTC染色液可重復(fù)使用2-3次,可將用過的TTC染色液放到新的容器內(nèi)繼續(xù)使用?!?br />2)【可選】輕柔的吸取緩沖液(如1×PBS)將組織表面多余的染色液沖洗掉;
3)此時(shí)即可觀察或者拍照。若需長久保存,用4%多聚甲醛溶液(貨號:P1110)固定10-20min。
注意事項(xiàng)
1)本品具有微量的光和熱敏感性,使用以及存放的過程中避免長時(shí)間曝光或者接觸到過高溫度下。
2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。