GelRed 核酸染料(500μL in water, 10,000 X)
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 | 保存 | 價格(元) |
GelRed 核酸染料(500μL in water, 10,000 X) | D1101L1122 | 500μL | 室溫 | 550 |
GelRed是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有*設(shè)計的熒光染料。在游離狀態(tài)下,GelRed發(fā)出微弱的熒光,但一旦與雙鏈DNA結(jié)合后,熒光大大增強(qiáng)。因此,GelRed的熒光信號強(qiáng)度與雙鏈DNA的數(shù)量相關(guān),可以根據(jù)熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數(shù)量。GelRed與 EB 有相同的光譜特性,無需改變?yōu)V光片及觀察裝置。標(biāo)準(zhǔn)的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用,使用與觀察 EB 相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可,在 300 nm 紫外光附近可得到*激發(fā)。GelRed的zui大吸收波長約為518 nm,發(fā)射波長zui大約為605 nm。GelRed 與雙鏈DNA的親和力非常高,因此可以用做電泳前染色,對分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq 酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等)沒有抑制作用。另外,GelRed 與EB相比,誘變能力大大降低。
我公司經(jīng)*艱苦分析研發(fā),開發(fā)成功本產(chǎn)品,本產(chǎn)品生產(chǎn)條件極為苛刻,反應(yīng)全程幾乎均為一步步重結(jié)晶完成,幾乎沒有過柱純化步驟。GelRedzui初由美國Biotium公司研發(fā),艾姆斯試驗表明,這種新型染料細(xì)胞透過性、誘變性方面表現(xiàn)優(yōu)異,得到市場廣泛認(rèn)可。據(jù)我們所知,市場上大量宣稱安全無毒、分裝進(jìn)口的所謂安全染料大都名不副實。在此我們對原廠家Biotium表達(dá)敬意,也請廣大客戶能選擇到真正安全、高質(zhì)的產(chǎn)品。
運(yùn)輸與保存方法:常溫運(yùn)輸、保存,保質(zhì)期24個月。
GelRed 核酸染料(500μL in water)使用方法:
1.膠染法(用法同EB) (1)制膠時加入GelRed核酸染料(例如:每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×儲液,以此比例類推)。 (2)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。 注意事項: 此方法染色染料用量相對較少,500 μL染料大約可以做100塊50 mL的膠。 由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。 含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備,并*保存直到使用。 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
2.泡染法 (1)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。 (2)用H2O將GelRed 10,000×儲液稀釋約3,300倍到0.1 M NaCl中,制成3×染色液。(例如將15μL GelRed 10,000×儲液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中)。 (3)將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中,緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠,室溫振蕩染色30 min左右,*染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介于30 min到1 h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。
GelRed 核酸染料(500μL in water)注意事項:
1)用泡染法染色時,染料用量較多,單次使用的染色液可重復(fù)使用3次左右。3×GelRed染色液可以大量制備,在室溫下避光保存直至用完。
2)如果總是看到條帶彌散或分離不理想,建議使用泡染法染色以確認(rèn)問題是否與染料有關(guān)。
3)如果染色后問題依舊存在,則說明問題與染料無關(guān),請嘗試:降低瓊脂糖濃度、延長凝膠時間以保證邊緣清晰、改進(jìn)上樣技巧或選擇泡染法染色。
3.預(yù)染法(zui省染料的染色方法,按25μL體積上樣,500μL原液理論做20萬個樣品)
1)該方法適用于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳
2)工作液的配制:用電泳緩沖液將10000×的GelRed原液稀釋1000倍,即為10 X GelRed工作液。GelRed工作液可以置2-8℃冷藏一個月以上。
3)制膠:按常規(guī)方法制膠,不含任何染料。
4)樣品染色:向分析樣品中加入GelRed工作液和載樣緩沖液,室溫放置10分鐘,使GelRed與樣品中DNA充分結(jié)合。GelRed工作液加入量為總上樣量的1/10,使GelRed在上樣時的終濃度為1X.
5)DNA Marker染色:將5μL DNA Marker和1μLGelRed工作液混勻,室溫放置5分鐘,使GelRed與DNA充分結(jié)合。
6)上樣、電泳:按常規(guī)操作。 注意事項: 根據(jù)染料分子量小,帶電荷少的特性開發(fā)本染色方法,按照一塊膠10個樣品計算,500μL原液理論上可以完成2萬塊膠的染色。
GelRed 核酸染料(500μL in water)疑難解答:
1. 在常規(guī)用酒精沉淀核酸的過程中,GelRed 可以全部從雙鏈核酸上去掉。
2. 如果想對用 GelRed 染過的膠進(jìn)行 Southern blots,建議在預(yù)雜化和雜化溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS。
3. 在紫外照射觀察下,與雙鏈 DNA 接合的 GelRed 呈現(xiàn)紅色熒光。
4. GelRed對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
5. GelRed原液在室溫保存,如放置冰箱保存會產(chǎn)生部分沉淀,使用前適當(dāng)加熱并搖勻即可正常使用。
幾種核酸染料比較
名稱 | 靈敏度 | 穩(wěn)定性 | 適用性 | 安全性 | 價格 |
GelRed | 高 | 高 | 通用大小片段電泳染色 | 美國安全認(rèn)定無毒 | 中 |
GelGreen | 高 | 高 | 通用大小片段電泳染色 | 美國安全認(rèn)定無毒 | 中 |
SYBR Green I | * | 差 | 100bp以上片段電泳染色 | 花菁染料,低毒 | 高 |
SYBR Green II | * | 差 | 單鏈核酸分子電泳染色 | 花菁染料,低毒 | 高 |
Gold View I | 低 | 高 | 500bp以上片段電泳染色 | 高毒性,強(qiáng)致癌 | 低 |
EB | 低 | 高 | 100bp以上片段電泳染色 | 強(qiáng)致癌,強(qiáng)誘變 | 低
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