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ELISA 樣本的處理 :ELISA 檢測的目的是為實驗提供準確可靠的定量分析實驗依據(jù)。為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠
性,在實驗過程中必須堅持全面質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制。在收集標本前都必須有一個完整的
計劃。
注意事項:
每個標本量收集體積= 100ul × 檢測種類,如要做復(fù)孔,標本量收集體積= 100ul × 檢測
種類×2 。
對于作某一個具體指標來說,先用一系列稀釋度作一批標本測定,得出對實驗有意義
的一個稀釋度(即測定劑量反應(yīng)曲線),然后用一個zui適稀釋度測定即可。
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進行檢測的標本,儲存在
4 ℃ 備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在 -20 ℃ 或 -70 ℃ 條
件下保存。避免反復(fù)凍融。標本 2 -8 ℃ 可保存 48 小時, -20 ℃ 可保存 1 個月。 -70 度
可保存 6 個月。部分激素類標本需添加抑肽酶。
血清標本采集時,應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),
以 HRP為標記的 ELISA 測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
為了保證尿液檢測結(jié)果的準確性,必須正確收集尿液標本和保存。盛尿容器要清潔干燥。
使用一次性的容器(如塑料尿杯),避免因用藥并清洗不干凈而造成的污染,影響檢
測結(jié)果。尿液標本必須新鮮,留取后,應(yīng)及時檢測或保存,以免細菌繁殖。因在室溫中久
置后(尤其是夏季)尿中磷酸鹽等可析出結(jié)晶而干擾檢測。
標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性 HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。
保存過久可發(fā)生聚合在 ELISA中可使本底加深。
凍結(jié)標本融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛
倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。
混濁或有沉淀的標本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
反復(fù)凍融會使蛋白效價降低,所以待測標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。也可
加入適當(dāng)防腐劑。
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