人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒代測
人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISA試劑盒代測
1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
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1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備材料
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
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TEN緩沖液(1×,pH7.2) · 抗體透析緩沖液 · 免疫組化 · 500ml · 室溫,12個月 · 主要由Tris、EDTA、氯化鈉等組成,pH值為7.2。
western轉(zhuǎn)移緩沖液(5×,尼龍膜) · 蛋白印跡轉(zhuǎn)移緩沖液或轉(zhuǎn)膜緩沖液,適用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到尼龍膜,不適用于PVDF膜和NC膜 · 免疫印跡 · 500ml · 4℃,3個月 · 主要由Tris、甘氨酸組成,臨用前稀釋后加入甲醇。
MOPS電泳緩沖液(1×,RNase free) · 主要用于RNA電泳 · 核酸電泳 · 500ml · 室溫,避光,6個月 · 主要由MOPS、乙酸鈉、EDTA、DEPC水等組成,見光易變黃。
核固紅染色液(0.1%) · 細(xì)胞核、網(wǎng)狀纖維染色,常用于復(fù)染 · 結(jié)締染色 · 100ml · 室溫,避光,12個月 · 主要由核固紅、去離子水組成。
氨基肽酶染色液(同時偶聯(lián)法) · 氨基肽酶染色 · 酶類染色 · 3×50ml · 4℃,避光,6個月 · 主要由丙胺酰孵育液、對品紅鹽酸溶液、硫酸銅溶液、陰性對照等組成,染色后酶活性部位呈棕黃色。
Tween20/TBS溶液(10×TBST,pH7.4) · 又稱為TTBS,常規(guī)PH緩沖液,常用于清洗western blot 中蛋白印跡膜。 · 免疫印跡 · 500ml · 4℃,6個月 · 主要由Tris-HCl(pH7.4)、氯化鈉、Tween20等組成。
DNaseⅠ溶液(1mg/ml) · 去除DNA · DNA溶液 · 5ml · —20℃,12個月 · 主要由DNaseⅠ酶、甘油等組成。
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