圓環(huán)病毒抗體檢測試劑盒
豬圓環(huán)病毒抗體檢測試劑盒使用說明書
【原理】
豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus ,PCV)是近年來新發(fā)現(xiàn)的引起仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥的必需病原。PCV2具有致病性,主要引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合癥,還可引起豬皮炎和腎病綜合癥、間質性肺炎和繁殖障礙等。主要感染斷奶仔豬,以發(fā)熱、漸進性消瘦、呼吸困難和黃疸等癥狀為特征,死亡率5%-30%,給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經濟損失。檢測特異性豬圓環(huán)病毒抗體,可作為豬場圓環(huán)病疫苗的免疫監(jiān)測及該病輔助檢測指標。
本試劑盒采用ELISA方法檢測豬血清中特異性抗圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體。本試劑靈敏度高,特異性強,重復性好,操作方便快速,可分多次使用。
【試劑組成】
1.預包被板 | 48T/96T; |
| 7. 終止液(6號液) | 1支; |
2.酶結合物(1號液) | 1支; |
| 8. 陽性對照品 | 1支; |
3.濃縮洗滌液(2號液) | 1支; |
| 9. 陰性對照品 | 1支; |
4.底物(3號液) | 1支; |
| 10.不干膠膜 | 1/2片; |
5.顯色劑(4號液) | 1支; |
| 11.自封袋 | 1個; |
6.樣本稀釋液(5號液) | 1支; |
| 12.使用說明書 | 1份; |
【操作程序】
1.洗滌液配制 用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液(2號液)按1:10稀釋,如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水充分混勻即為工作洗滌液。
2.樣本稀釋 用樣本稀釋液(5號液)將待檢血清樣本按1:40稀釋,如取5ul樣本與195ul樣本稀釋液,混勻。陰性、陽性對照品不用稀釋,直接加樣。
3. 加樣反應 每次試驗設陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔(分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100ul)。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100ul。37℃避光反應30分鐘后,甩去孔內液體,每孔注滿工作洗滌液洗滌3次,每次均需停留1分鐘后再甩凈,拍干。
4.加酶反應 除空白對照孔外,每孔加酶結合物(1號液) 1滴。37℃避光反應30分鐘后,甩去孔內液體,如上洗滌,拍干。
5.顯色反應 加底物液(3號液)和顯色劑(4號液)各1滴,混勻,37℃避光顯色10分鐘。加終止液(6號液)1滴,終止反應(加終止液后,藍色會變?yōu)辄S色)并判讀結果。
【結果判斷】
陰性對照呈無色或淺黃色,陽性對照呈明顯黃色,表示試驗有效。
以空白對照調零,用酶標儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度(A值)。待檢孔A值大于陰性對照A值平均值的2.1倍者判為陽性。如陰性對照A值的平均值低于0.08時按0.08計算。
【注意事項】
1.試劑盒于2-8℃保存,有效期12個月。每次使用前應先平衡至室溫。
2.未使用完的板條應密封保存。
3.試劑盒中終止液具有腐蝕性,要小心使用。
4.瓶蓋每次使用后要擰緊,各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。
5.試驗樣本應為無染菌、無血脂、無溶血的血清。任何樣本都應視為傳染源妥善處理。
6. 37℃孵育時,建議使用水浴箱。如無條件,可在溫箱中放置濕盒進行反應并同時用不干膠膜封蓋板孔。