人參中總皂甙的超聲波快速提取方法研究

    人參中總皂甙的超聲波快速提取方法研究

      長(zhǎng)期以來(lái)，在人參總甙的測(cè)定方法中，總皂甙的提取過(guò)程一直是決定方法快慢的關(guān)鍵步驟。常用的提取方法有索氏提取法和超聲波提取法。索氏法是經(jīng)典的提取方法，應(yīng)用范圍較廣，提取比較*；缺點(diǎn)是提取時(shí)間長(zhǎng)，操作繁瑣，約需2個(gè)工作日。超聲波提取法大大縮短了提取時(shí)間，只需約1個(gè)工作日，提高了工作效率。本法采用甲醇作提取劑。研究了超聲波提取的各種影響因素，建立了人參中總皂甙的半微量快速提取方法，將單一樣品的分析時(shí)間進(jìn)一步縮短為約lh，大大提高了分析速度及工作效率，節(jié)省試劑，降低了實(shí)驗(yàn)室勞動(dòng)強(qiáng)度。與索氏提取法對(duì)照分析表明，本法不僅快速，而且也比較準(zhǔn)確，對(duì)樣品的提取和測(cè)定*符合一般測(cè)試要求。

1 試驗(yàn)部分

1．1 主要儀器與試劑

760MC雙光束紫外分光光度計(jì),超聲波發(fā)生器，工作頻率40kHz。香草醛一冰乙酸溶液：80g·L 人參皂甙（Re）標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥98 （吉林省藥品檢驗(yàn)所提供）人參皂甙標(biāo)準(zhǔn)溶液：lmg·ml ，稱取人參皂甙標(biāo)準(zhǔn)品5．Qmg，用甲醇溶解并定容至5ml。其他試劑均為分析純，水為一次蒸餾水。

1．2 樣品中總皂甙的提取

稱取供試樣品約0．1OOg[粒度應(yīng)通過(guò)60號(hào)篩（孔徑0．25mm）]于10ml具塞試管中，準(zhǔn)確加入甲醇2ml，加塞后放人超聲波水浴中超聲30min。然后取出試管置離心機(jī)中以1500r·min 離心15min，取出，備用。

1．3 樣品測(cè)定

移取上清液50 l于10ml具塞試管中，放入水浴中揮干溶劑。取出后再依次加入香草醛一冰乙酸溶液0．2ml，高氯酸0．8ml，搖勻 置于60℃水浴中加熱l5min。取出后于冷水中冷卻至室溫，再加入冰乙酸5ml，搖勻，于560nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，與人參中總皂甙的超聲波快速提取方法研究標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照，計(jì)算樣品中總皂甙含量。

2 結(jié)果與討論

2．1 取樣量對(duì)超聲提取效果的影響

與所有的聲波一樣，超聲波在不均勻的介質(zhì)中傳播也會(huì)發(fā)生散射衰減。在對(duì)樣品進(jìn)行超聲提取時(shí)，樣品整體作為一種介質(zhì)是各向異性的，即在各個(gè)方向上都不均勻，造成超聲波的散射，因此，到達(dá)樣品內(nèi)部的超聲能量會(huì)有一定程度的衰減，影響提取效果。由于本法采用10ml具塞試管作為樣品提取時(shí)的容器，其截面積較小，當(dāng)取樣量大時(shí)，則樣品厚度增大，到達(dá)樣品內(nèi)部的超聲能量衰減也就越嚴(yán)重，提取效果越差。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果及其他因素，本法選擇取樣量為0．1g左右。

2．2 供試樣品的細(xì)度對(duì)提取效果的影響

超聲波不僅在兩種介質(zhì)的界面處發(fā)生反射和折射，而且在較粗糙的界面上還發(fā)生散射，引起能量的衰減_5]。在本法中，供試樣品的細(xì)度將直接影響作用于樣品中的超聲波能量的大小。資料表明，當(dāng)顆粒直徑與超聲波長(zhǎng)的比值為l ～lO 時(shí)，這種散射很??；當(dāng)比值大于lO 時(shí)，散射逐漸增大，造成能量大幅度衰減l53。本法所用超聲波發(fā)生器工作頻率為40kHz，經(jīng)計(jì)算得知，當(dāng)供試樣品的細(xì)度為6O目時(shí)，其顆粒直徑與超聲波長(zhǎng)的比值大約為1 ，此時(shí)提取效果較好；當(dāng)細(xì)度小于6O目時(shí)，提取效果下降。此外，在較大的顆粒內(nèi)部，溶劑的浸提作用也會(huì)明顯減弱，這也是供試樣品細(xì)度對(duì)提取效果產(chǎn)生影響的另一個(gè)重要原因。

2．3 提取時(shí)間的選擇

通過(guò)對(duì)4個(gè)不同的人參樣品，采用不同的提取時(shí)間來(lái)進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明，當(dāng)超聲提取時(shí)間達(dá)到30min時(shí)，即可達(dá)到較好的提取效果。

2．4 超聲提取液直接顯色及與標(biāo)準(zhǔn)品的光譜對(duì)照

文獻(xiàn)中不論索氏提取法還是超聲波提取法（采用正丁醇作提取劑），都要經(jīng)過(guò)脫脂處理。本法采用甲醇作提取劑，由于甲醇的極性要高于正丁醇，脂類在甲醇中的溶解度要小于在正丁醇中的溶解度，并且本法取樣量?jī)H為0．1g（索氏提取法約2g，文獻(xiàn)超聲波法為1．0g），基體干擾水平低?？刹扇〖状汲曁崛〔㈦x心后，直接吸取甲醇溶液進(jìn)行顯色測(cè)定，省去脫脂步驟，簡(jiǎn)化了試驗(yàn)操作，進(jìn)一步縮短了檢驗(yàn)時(shí)間。與索氏提取法并經(jīng)脫脂處理的樣品吸收光譜相對(duì)比，其形狀相似，zui大吸收峰位置相同，同時(shí)也與標(biāo)準(zhǔn)品顯色后的吸收光譜作了對(duì)比，結(jié)果表明本法省略了脫脂步驟是基本可行的。

2．5 方法對(duì)照試驗(yàn)

分別采用索氏提取法和超聲波提取法（本法）進(jìn)行人參總皂甙的9次平行測(cè)定試驗(yàn)，并將測(cè)定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析比較。結(jié)果表明，經(jīng)t檢驗(yàn)和F檢驗(yàn)，兩種方法之間無(wú)顯著性差異。

2．6 綜合提取效率比較

本法采用超聲波提取法進(jìn)行人參總皂甙測(cè)定，所用提取劑的量和樣品量?jī)H為索氏提取法的幾十分之一，而單樣分析速度則快十幾倍左右；即使與文獻(xiàn)超聲波提取法相比，在分析速度和節(jié)省試劑方面也有較明顯的優(yōu)勢(shì)，并且在進(jìn)行成批樣品分析時(shí)具有更大的*性。