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說(shuō)到分子篩，大家肯定都不陌生。分子篩又叫做凝膠過(guò)濾層析、空間排阻色譜等，是應(yīng)用蛋白質(zhì)分子量或分子形狀的差異去進(jìn)行分離的一項(xiàng)蛋白純化技術(shù)。通俗地說(shuō)，該技術(shù)就是像篩子一樣，將分子依據(jù)“高矮胖瘦”進(jìn)行分離。
這項(xiàng)技術(shù)使用的填料，是一類(lèi)多孔性天然來(lái)源的聚合物材料。在層析過(guò)程中，直徑大于凝膠網(wǎng)孔的生物分子，只能沿凝膠顆粒間的空隙隨溶劑流動(dòng)，流程短，移動(dòng)速度快，首先被洗脫；中等大小的分子，可以在凝膠顆粒內(nèi)外分布，部分進(jìn)入顆粒，因此在大分子物質(zhì)和小分子物質(zhì)之間被洗脫；直徑小于凝膠凝膠網(wǎng)孔的生物分子，可以自由進(jìn)出網(wǎng)孔，移動(dòng)速率慢而最后被洗脫。
Fig. 1 凝膠層析原理圖
凝膠過(guò)濾主要應(yīng)用于兩類(lèi)分離領(lǐng)域：
• 組分分離（脫鹽/換液）：上樣量可達(dá)柱體積的30%。
• 精細(xì)分離（分離不同大小分子量的生物分子）：上樣體積為0.5%~4%，柱床高度通常高于60cm。
博格隆Bestdex G-25系列產(chǎn)品是以葡聚糖為基架材料制成的凝膠過(guò)濾介質(zhì)，具有親水、多孔的特性。
根據(jù)顆粒大小，博格隆Bestdex G-25系列推出了四種類(lèi)型的產(chǎn)品：Bestdex G-25 C（Coarse，粗）、Bestdex G-25 M（Medium，中）、Bestdex G-25 F（Fine，細(xì)）、Bestdex G-25 SF（Superfine，超細(xì)）。
+顆粒大小呈正態(tài)分布，在該范圍內(nèi)的顆粒占總數(shù)的80%以上
++不同溶液中顆粒大小會(huì)有差異，本數(shù)據(jù)為在PBS中顆粒大小
+++BXK26/70，柱高60cm，壓力0.3MPa測(cè)得
Fig. 2 博格隆Bestdex G-25系列
• 非吸附層析：靠分子量大小差異實(shí)現(xiàn)分離，無(wú)吸附與解吸附過(guò)程，樣品回收率高。
• 操作條件溫和：能夠在相當(dāng)廣的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行操作。
• 僅需一種緩沖液：全程僅需一種緩沖液即可完成實(shí)驗(yàn)，操作簡(jiǎn)單。
Bestdex G-25系列凝膠過(guò)濾介質(zhì)通過(guò)分子篩效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)樣品的分離純化。常用于蛋白質(zhì)、多糖、核酸等生物樣品的緩沖液置換、脫鹽和去除小分子物質(zhì)，也可以用于多肽、寡核苷酸的分離純化，以及抗生素、化學(xué)合成藥物、天然產(chǎn)物的分離純化，還可用于化工中納米材料的提純以及環(huán)保領(lǐng)域的污水處理等領(lǐng)域。
• 層析柱：EzFast 5mL G-25 F x 2
• 平衡液：0.2M NaHCO3、0.5M NaCl，pH8.3
• 上樣體積：1.9mL
Fig. 3 Bestdex G-25 凝膠層析圖譜
由于介質(zhì)是以干粉的方式提供的，所以需要先溶脹，然后裝填層析柱后使用。
一般選用水相緩沖液，緩沖液的pH和電導(dǎo)對(duì)于分離的效果影響不大，主要考慮樣品在緩沖液中的穩(wěn)定性。
以推薦的流速運(yùn)行，柱高越大流速越慢。
為防止樣品堵塞柱子，在上樣前樣品需要用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，若目的物和雜質(zhì)差別比較小，上樣體積按照柱體積的1%~5%上樣；若目的物和要去除的雜質(zhì)差別比較大（如去除樣品中的無(wú)機(jī)鹽或緩沖液交換），上樣體積按照柱體積的10%~25%上樣。
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