激光掃描共聚焦顯微鏡在組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)中的應(yīng)用

來源：上海源葉生物科技有限公司 2012年02月25日 10:29

激光掃描共聚焦顯微鏡（laser scanning confcal microscope,LSCM）是激光、電子攝像和計(jì)算機(jī)圖像處理等現(xiàn)代高科技手段相互滲透的產(chǎn)物。由于其高分辨率，高靈敏度及高放大率等特點(diǎn)，在細(xì)胞水平上能作多種功能測量和分析，如熒光定量測量、共聚焦圖像分析、三維圖像重建、活細(xì)胞動(dòng)力學(xué)參數(shù)監(jiān)測和細(xì)胞間通訊研究等，成為生物醫(yī)學(xué)重要的研究工具。一臺(tái)配置完備的激光掃描共聚焦顯微鏡已經(jīng)在功能上*取代了以往任何一種光學(xué)顯微鏡，它相當(dāng)于幾種制作精良的常用顯微鏡有機(jī)組合，如倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、暗視野顯微鏡及相差顯微鏡等，可謂是普通光學(xué)顯微鏡質(zhì)的飛躍。激光掃描共聚焦顯微鏡除能對(duì)組織細(xì)胞進(jìn)行三維圖像分析和各種熒光標(biāo)記物的微量分析外，還能進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺和pH值等動(dòng)態(tài)分析測量、細(xì)胞受體移動(dòng)檢測、膜電位變化檢測、酶活性和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)測定等。因此，它可以對(duì)組織細(xì)胞的多種功能進(jìn)行自動(dòng)地微量定位和定量。

激光掃描共聚焦顯微鏡在組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)中的主要應(yīng)用是通過一種或多種熒光探針標(biāo)記后，對(duì)固定或活體組織細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行觀察研究，免疫熒光組織化學(xué)是應(yīng)用zui多的技術(shù)。激光掃描共聚焦顯微鏡具有紫外光和激光雙重激發(fā)光源系統(tǒng)，免疫熒光組織化學(xué)染色后抗體己被標(biāo)記熒光素，不同的熒光素被不同波長的光激發(fā)，熒光強(qiáng)度的變化可被激光掃描共聚焦顯微鏡中的計(jì)算機(jī)分析軟件采集分析，從而準(zhǔn)確反映各指標(biāo)量的變化。當(dāng)這些標(biāo)本用普通熒光顯微鏡觀察時(shí)，來自焦點(diǎn)以外其他區(qū)域的熒光對(duì)結(jié)構(gòu)分辨率干擾較大，尤其是標(biāo)本厚度在2um以上時(shí)，其影響更為顯著。共聚焦方式可以排除焦點(diǎn)之外熒光干擾使分辨率提高。激光掃描共聚焦顯微鏡的功能可分為圖像分析功能和細(xì)胞生物學(xué)功能兩大類，運(yùn)用于組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)方面的主要是圖像分析功能。凡是可以標(biāo)記特異性熒光探針的組織細(xì)胞標(biāo)本均可以利用激光掃描共聚焦顯微鏡進(jìn)行圖像分析。它的圖像分析處理功能主要體現(xiàn)在三方面，即光學(xué)切片、三維圖像重建和熒光定位以及定量分析。

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