干燥設(shè)備 粉碎設(shè)備 混合設(shè)備 反應設(shè)備 過濾分離設(shè)備 過濾材料 滅菌設(shè)備 萃取設(shè)備 貯存設(shè)備 傳熱設(shè)備 鍋爐 塔設(shè)備 結(jié)晶設(shè)備 其它制藥設(shè)備
杭州銘特生物科技有限公司
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號BL509A
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)代理商
所 在 地杭州市
聯(lián)系方式:吳沛查看聯(lián)系方式
更新時間:2021-07-01 12:25:01瀏覽次數(shù):656次
聯(lián)系我時,請告知來自 制藥網(wǎng)產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 級別 | 其他 |
---|
Western及IP細胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
Western及IP細胞裂解液
別名:Cell lysis buffer for Western and IP
產(chǎn)品簡介:
Western及IP細胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP),是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
Western及IP細胞裂解液的主要成分為20mM Tris (pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多種抑制劑??梢杂行б种频鞍椎慕到猓⒕S持原有的蛋白間相互作用。用Western及IP細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì),不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用說明:
對于培養(yǎng)細胞樣品:
1、融解Western及IP細胞裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
2、對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(若血清中的蛋白沒有干擾,可不洗)。按照6孔板每孔加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應無明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。
3、充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加100ul裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150或200ul。
對于組織樣品:
1、把組織剪切成細小的碎片。
2、融解Western及IP細胞裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1mM。
3、按照每20mg組織加入100-200ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)
4、用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5、充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意事項:
1、為取得*佳的使用效果,盡量避免過多的反復凍融??梢赃m當分裝后使用。
2、需自備PMSF。
3、裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
4、可能需要通過一些預實驗來摸索*佳的適合您實驗條件的裂解液。
5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
保存條件:
-20℃保存,一年有效。
您感興趣的產(chǎn)品PRODUCTS YOU ARE INTERESTED IN
制藥網(wǎng) 設(shè)計制作,未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ?
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
請輸入你感興趣的產(chǎn)品
請簡單描述您的需求
請選擇省份
聯(lián)系方式
杭州銘特生物科技有限公司