利用斑馬魚模型評價血液毒性

利用斑馬魚模型評價血液毒性

【評價原理】

斑馬魚作為一種理想的人類血液毒性模型，是以其造血系統(tǒng)與人類造血系統(tǒng)在進化上高度保守性尾前提的。通過與人類造血類似的信號傳導通路，斑馬魚形成了以包括紅系、髓系、淋系及巨核系為主的造血系統(tǒng)。斑馬魚可建立多種血液系統(tǒng)毒性模型，主要包括紅細胞、白細胞、出凝血障礙性毒性三大類，因此主要與斑馬魚中性粒細胞、巨噬細胞、紅細胞和血流量相關。由于斑馬魚具有身體積小、實驗周期短等優(yōu)點，可以用作評估血液毒性的一種便捷模型。

轉基因中性粒細胞綠色熒光斑馬魚中性粒細胞自身發(fā)出熒光，可以直接在熒光顯微鏡下觀察中性粒細胞個數(shù)；黑色素等位基因突變斑馬魚通體透明，經過巨噬細胞染色后可以直接在顯微鏡下觀察巨噬細胞數(shù)量；利用鄰聯(lián)茴香胺將斑馬魚心臟紅細胞染色，在顯微鏡下可以直接觀察紅細胞數(shù)量（信號強度）。

【實驗方案】利用斑馬魚模型評價血液毒性

我們將受測試斑馬魚分成兩組，分別是正常對照組和供試品組(供試品通過溶解到養(yǎng)魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內)。

處理結束后，(1)通過熒光顯微鏡觀察并統(tǒng)計斑馬魚中性粒細胞數(shù)量；(2)通過染色斑馬魚巨噬觀察巨噬細胞細胞數(shù)量；(3)通過鄰聯(lián)茴香胺染色心臟部位紅細胞，在顯微鏡下觀察心臟紅細胞染色強度。

【結果展示】

圖1.斑馬魚中性粒細胞表型圖

（綠色小點為中性粒細胞）

可以看到，供試品組中性粒細胞個數(shù)較正常對照組明顯減少。

圖2.斑馬魚巨噬細胞表型圖

（紅色小點為巨噬細胞）

可以看到，供試品組巨噬細胞數(shù)量較正常對照組明顯減少。

圖3.斑馬魚紅細胞抑制表型圖

（藍色虛線框內為分析區(qū)域,分析紅細胞染色強度）

可以看到，供試品組心臟紅細胞染色強度較正常對照組明顯降低。

【評價結論】

1. 經過每組30尾斑馬魚的對比實驗，供試品組的中性粒細胞數(shù)量、巨噬細胞數(shù)量明顯減少，紅細胞染色強度明顯降低。

2. 本實驗證實了此供試品誘發(fā)血液毒性。