詳細(xì)介紹
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Bordetella spp.PCR |
貨號(hào) | YZP3362 |
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
以下是波氏桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的相關(guān)產(chǎn)品:
卡托普利二硫化物 英文名稱:Kato Pury two sulfide 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
卡托普利 英文名稱:Kato Pury 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
倍他環(huán)糊精 英文名稱:Beta cyclodextrin 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
枸櫞酸他莫昔芬E-異構(gòu)體 英文名稱:Tamoxifen citrate E isomers 規(guī)格::30mg 保存::-20℃,避光
氟胞嘧啶 英文名稱:Flucytosine 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
氟康唑 英文名稱:Fluconazole 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
氟 英文名稱:Haloperidol 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
苯噻啶 英文名稱:Benzethidine 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
3,5-二氨基-6-吡嗪-2-羧酸甲酯 英文名稱:3, 5- two amino -6- chloro methyl pyrazine -2- 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
鹽酸阿米洛利 英文名稱:Amiloride hydrochloride 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
氫噻嗪 英文名稱:Hydrochlorothiazide 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
亞硒鈉 英文名稱:Sodium selenite 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
維A酸 英文名稱:Vitamin A acid 規(guī)格::100mg 保存::-20℃,避光
枸櫞酸己定 英文名稱:Citric acid and chlorhexidine 規(guī)格::50mg 保存::-20℃,避光
波氏桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)大鼠α1抗胰蛋白酶前體(pre-α1-AT)ELISA Kit Rat α1-Antitrypsin Precursor,pre-α1-AT ELISA Kit
豚鼠α干擾素(IFN-α)ELISA Kit Guinea Pig Interferon α,IFN-α ELISA Kit
人幾丁質(zhì)酶3樣蛋白1(YKL-40/CHI3L1)ELISA Kit Human Chitinase-3-like Protein 1,YKL-40/CHI3L1 ELISA Kit
豚鼠ELISA Kit
豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)ELISA Kit Porcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit
人異質(zhì)性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)ELISA Kit Human heterogeneous nuclear ribonucleoprotein P2,hnRNP P2 ELISA Kit
人β葡萄糖苷酶(β-glucosidase)ELISA Kit Human β-glucosidase ELISA Kit
人淀粉狀蛋白β(A4)前體蛋白結(jié)合家族B成員1(FE65)ELISA Kit Human FE65 ELISA kit
人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)ELISA Kit Human Platelet associated antibody,PA-IgM ELISA Kit
人青少年2型血色素沉著癥/幼年型血色病相關(guān)蛋白2(HFE2)ELISA Kit human HFE2 LISA Kit
犬降鈣素(CALCA)ELISA Kit Dog calcitonin,CALCA ELISA kit
大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)ELISA Kit Rat Laminin alpha 1,LAMA1 ELISA Kit
人CC趨化因子7 (CCL7/MCP3/SCYA6/SCYA7)ELISA Kit Human CCL7 ELISA kit
小鼠血纖蛋白原γ鏈(FGG)ELISA Kit Mouse Fibrinogen Gamma Chain,F(xiàn)GG ELISA Kit