禽波氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

以下是禽波氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書的相關(guān)產(chǎn)品：

夫拉扎勃（原：呋咱甲氫龍） 英文名稱：J La Szabo (formerly: furazabol) 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

吡拉西坦 英文名稱：Laci Staw 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

豆腐果苷 英文名稱：Helicid 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

大蒜素 英文名稱：Allicin 規(guī)格：：0.5ml 保存：：-20℃，避光

紫杉 英文名稱：Paclitaxel 規(guī)格：：30mg 保存：：-20℃，避光

腎上腺色腙 英文名稱：Carbazochrome 規(guī)格：：50mg 保存：：-20℃，避光

更昔洛韋 英文名稱：Ganciclovir 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

氨力農(nóng) 英文名稱：An Linong 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

鈉化 英文名稱：Sodium chloride 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

鹽酸特拉唑嗪 英文名稱：Terazosin hydrochloride 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

苯磺酸氨地平 英文名稱：Amlodipine besylate 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

阿苯達(dá)唑 英文名稱：Albendazole 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

烏苯美司 英文名稱：Ubenimex 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

維生素B2 英文名稱：Vitamin B2 規(guī)格：：100mg 保存：：-20℃，避光

禽波氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒說明書山羊白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA Kit  Goat Interleukin-8,IL-8 ELISA Kit

人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因A(MICA)ELISA Kit  Human major histocompatibility complex class I chain-related gene A,MICA ELISA Kit

人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)ELISA Kit  Human PRF1/PFP ELISA Kit

猴slit同源物2(果蠅)(SLIT2)ELISA Kit  Monkey slit homolog 2(Drosophila)(SLIT2)ELISA kit

人G蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)ELISA Kit  Human GPR44 ELISA kit

人去乙?；窼irtuin-2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)ELISA Kit  Human SIRT2/SIR2L/SIR2L2 ELISA Kit

人15-epi-氧脂素 A4(15-epi-LXA4)ELISA Kit  Human 15-epi-Lipoxin A4,15-epi-LXA4 ELISA Kit

大鼠骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白ELISA Kit  Rat Gremlin ELISA Kit

大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA Kit  Rat Alanine aminotransferase,ALT ELISA Kit

牛肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)ELISA Kit  Bovine pulmonary surfactant-associated protein B,SP-B ELISA Kit

牛布魯氏桿菌抗體(IgG)ELISA Kit  Bovine Brucella antibody IgG ELISA kit

植物維生素E(VE)ELISA Kit  Plant Vitamin E,VE EELISA Kit

山羊抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)ELISA Kit  Goat antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin,ADH/VP/AVP ELISA Kit

豬粘蛋白/粘液素2(MUC2)ELISA Kit  Pig Mucin-2,MUC2 ELISA Kit

使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。