詳細(xì)介紹
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí),由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作。
產(chǎn)品名稱(chēng) | |
英文名稱(chēng) | Alastrim VirusPCR |
貨號(hào) | YZP3246 |
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
以下是類(lèi)天花病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的相關(guān)產(chǎn)品:
五加皮 英文名稱(chēng):Wujiapi 規(guī)格::1g 保存::-20℃,避光
通關(guān)藤 英文名稱(chēng):Marsdenia tenacissima 規(guī)格::2g 保存::-20℃,避光
三棱 英文名稱(chēng):Rhizoma sparganii 規(guī)格::1g 保存::-20℃,避光
紅參蘆 英文名稱(chēng):Red ginseng reed 規(guī)格::0.2g 保存::-20℃,避光
沙棘 英文名稱(chēng):Sea buckthorn 規(guī)格::4g 保存::-20℃,避光
白薇 英文名稱(chēng):Bai Wei 規(guī)格::1g 保存::-20℃,避光
酸棗仁 英文名稱(chēng):Semen Ziziphi Spinosae 規(guī)格::1g 保存::-20℃,避光
英文名稱(chēng):Snow a wormwood 規(guī)格::1.0g 保存::-20℃,避光
徐長(zhǎng)卿 英文名稱(chēng):Cynanchum paniculatum 規(guī)格::0.5g 保存::-20℃,避光
豬殃殃 英文名稱(chēng):Galium aparine L. 規(guī)格::4g 保存::-20℃,避光
金盞銀盤(pán) 英文名稱(chēng):Biochemi 規(guī)格::2.0g 保存::-20℃,避光
繡線菊 英文名稱(chēng):Xiu Xianju 規(guī)格::2g 保存::-20℃,避光
黃柏 英文名稱(chēng):Cortex Phellodendri 規(guī)格::0.2g 保存::-20℃,避光
密蒙花 英文名稱(chēng):Buddleia 規(guī)格::0.5g 保存::-20℃,避光
類(lèi)天花病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)小鼠過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA Kit Mouse Catalase,CAT ELISA Kit
人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C(PIPLC)ELISA Kit Human phosphoinositide-specific phospholipase C,PIPLC ELISA Kit
小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)ELISA Kit Mouse Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF ELISA Kit
大鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)ELISA Kit Rat 3-O-methyldopa,3-OMD ELISA kit
兔子白介素1α(IL-1α)ELISA Kit Rabbit Interleukin 1α,IL-1α ELISA Kit
人谷氨酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA Kit human glutamic acid decarboxylase autoantibody IgG,GAD-Ab-IgG ELISA Kit
人抗甘氨酰tRNA合成酶(GARS)抗體ELISA Kit Human anti glycyl-tRNA synthetase(GARS)antibody ELISA kit
兔過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARA)ELISA Kit Rabbit peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARA ELISA kit
人血紅蛋白α亞基(HB-α)ELISA Kit Human α-subunits of hemoglobin,HB-α ELISA Kit
人Q熱科克斯體1(Q fever)抗體(IgA)ELISA Kit Human coxiella burnetii Q fever phase 1(Q fever)antibody(IgA)ELISA kit
大鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)的酪氨酸激酶1型受體(NTRK1)ELISA Kit Rat neurotrophic tyrosine kinase, receptor, type 1,NTRK1 ELISA kit
人α半乳糖基(α-Gal)ELISA Kit Human α-galactoyl,α-Gal ELISA Kit
人丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原(HCV core Ag)ELISA Kit Human Hepatitis C Virus (HCV) Core Antigen,HCV core Ag ELISA kit
魚(yú)免疫球蛋白M(IgM)ELISA Kit Fish immunoglobulin M,IgM ELISA kit