詳細介紹
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)定量檢測試劑盒(ELISA)使用說明書
【試劑盒名稱】
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)定量檢測試劑盒(ELISA)
人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒【試劑盒用途】
定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本和酶標工作液加入到預先包被人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)抗體的透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入顯色劑A、B液,顯色劑(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)含量。
【試劑盒組成】
1 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑A液 | 6mL |
2 | 標準品:8μg/L | 0.6mL | 8 | 顯色劑B液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 終止液 | 6mL |
4 | 標準品稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 樣本稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 酶標試劑 | 10mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
備注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:8、4、2、1、0.5、0.25μg/L
【需要而未提供的試劑和器材】
1、
2、標準規(guī)格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);每孔再加入酶標工作液100μL;空白對照孔不加。
4、溫育:
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,
7、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
9、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于
3、樣本應(yīng)充分離心,不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
5、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。
7、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
【操作程序總結(jié)】
準備試劑,樣品和標準品
計算
【檢測范圍】
0.25-8μg/L
【規(guī)格】
96人份/盒
【貯藏】
2
【有效期】
6個月
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