上海博麥德生物技術(shù)有限公司

主營產(chǎn)品: 培養(yǎng)基,生物培養(yǎng)基

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公司信息

聯(lián)人:
游經(jīng)理
址:
上海市閔行區(qū)莘建東路158號(hào)綠海大廈B座8F
編:
200110
鋪:
http://m.a6l3nk2.cn/st31116/
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廠商*人葉酸 (FA) ELISA 檢測試劑盒

2013-10-15  閱讀(683)

本試劑僅供研究使用     

 

試驗(yàn)原理:

FA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知FA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將FA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中FA的濃度呈比例關(guān)系。

 

試劑盒內(nèi)容及其配制

試劑盒成份(2-8℃保存)

96孔配置

48孔配置

配制

96/48人份酶標(biāo)板

1塊板(96T)

半塊板(48T)

即用型

塑料膜板蓋

1塊

半塊

即用型

標(biāo)準(zhǔn)品:80ng/ml

1瓶(0.6ml)

1瓶(0.3ml)

按說明書進(jìn)行稀稀

空白對照

1瓶(1.0ml)

1瓶(0.5ml)

即用型

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液

1瓶(4.0ml)

1瓶(2.0ml)

即用型

生物素標(biāo)記的抗FA抗體

1瓶(6.0ml)

1瓶(3.0ml)

即用型

親和鏈酶素-HRP

1瓶(8.0ml)

1瓶(4.0ml)

即用型

洗滌緩沖液

1瓶(20ml)

1瓶(10ml)

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

1瓶(6.0ml)

1瓶(3.0ml)

即用型

底物B

1瓶(6.0ml)

1瓶(3.0ml)

即用型

終止液

1瓶(6.0ml)

1瓶(3.0ml)

即用型

標(biāo)本稀釋液

1瓶(12ml)

1瓶(6.0ml)

即用型

 

自備材料

蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

 

安全性

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

 

操作注意事項(xiàng)

試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

 

樣品收集、處理及保存方法

血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

試劑的準(zhǔn)備

標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:

80 ng/ml

(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)

原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。

40 ng/ml

(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)

100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 ng/ml

(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)

100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 ng/ml

(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)

100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5.0 ng/ml

(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)

100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 ng/ml

(1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)

100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

0 ng/ml

(空白對照)

原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

 

洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

 

 

操作步驟

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案

 

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)

 

A

80

80

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

B

40

40

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

C

20

20

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

D

10

10

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

E

5.0

5.0

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

F

2.5

2.5

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

G

0

0

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

H

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

樣品

 

 

局限

6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

 

試劑盒性能

1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析

1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

 

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的FA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的FA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

 

3、檢測值范圍:0-80ng/ml

 

4、敏感度: 0.1 ng/ml

le6?Oml??% P/ang=EN-US style='color:black'>4、敏感度: 0.01 ng/ml

小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒 Mouse estrogen,E ELISA試劑盒
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小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISA試劑盒 Mouse Aquaporin 4,AQP-4 ELISA試劑盒
小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒 Mouse Aquaporin 3,AQP-3 ELISA試劑盒
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA試劑盒 Mouse Aquaporin 1,AQP-1 ELISA試劑盒
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小鼠脫氫表雄酮(DHEA)ELISA試劑盒 Mouse Dehydroepiandrosterone,DHEA ELISA試劑盒
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小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)ELISA試劑盒 Mouse receptor activator of nuclear factor kappa B ligand,RANKL ELISA試劑盒
小鼠血栓前體蛋白(TpP)ELISA試劑盒 Mouse thrombus precursor protein,TpP ELISA試劑盒
小鼠促性腺激素釋放激素(GnRH)ELISA試劑盒 Mouse gonadotropin-releasing hormone,GnRH ELISA試劑盒
小鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒 Mouse inhibin B,INH-B ELISA試劑盒
小鼠促甲狀腺素釋放激素(TRH)ELISA試劑盒 Mouse thyrotropin-releasing hormone,TRH ELISA試劑盒
小鼠促腎上皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)ELISA試劑盒 Mouse corticotropin releasing hormone,CRH ELISA試劑盒
小鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒 Mouse Insulin Receptor β,ISR-β ELISA試劑盒
小鼠糖化血紅蛋白A1c(GHbA1c)ELISA試劑盒 Mouse Glycated hemoglobin A1c,GHbA1c ELISA試劑盒
小鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISA試劑盒 Mouse lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA試劑盒
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒 Mouse soluble plaet endothelial cell adhesion molecule 1,sPECAM-1 ELISA試劑盒
小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISA試劑盒 Mouse Bone morphogenetic protein 7,BMP-7 ELISA試劑盒
小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 Mouse Hyaluronic acid,HA ELISA試劑盒
小鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒 Mouse ghcagons-like pepfide 1,GLP-1 ELISA試劑盒
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小鼠載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒 Mouse apoprotein B100,apo-B100 ELISA試劑盒
小鼠25羥基維生素D3(25(OH)D3/25 HVD3)ELISA試劑盒 Mouse 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA試劑盒
小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 Mouse N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA試劑盒
小鼠維生素C(VC)ELISA試劑盒 Mouse Vitamin C,VC ELISA試劑盒
小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)ELISA試劑盒 Mouse Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA試劑盒
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小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) ELISA試劑盒 Mouse Collagen Type Ⅰ,Col ⅠELISA試劑盒
小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 Mouse Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA試劑盒
小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒 Mouse soluble P-selectin,sP-selectin ELISA試劑盒



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