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主營(yíng)產(chǎn)品： elisa試劑盒說明書,elisa實(shí)驗(yàn),elisa原理 |
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主營(yíng)產(chǎn)品： elisa試劑盒說明書,elisa實(shí)驗(yàn),elisa原理 |
2012-10-12 閱讀(288)
| 提 供 商 | 上海隆壘生物科技有限公司 | 資料大小 | 44KB |
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快速選擇二級(jí)試劑的有效方法
免疫化學(xué)技術(shù)的成功與否常取決于選擇一個(gè)良好的二級(jí)試劑。二級(jí)試劑用于鑒定免疫染色和免疫印跡中未標(biāo)記的*抗體的位置。選擇*二級(jí)試劑時(shí)主要應(yīng)考慮4個(gè)方面的因素：①二級(jí)試劑所產(chǎn)生的背景；②檢測(cè)試劑的靈敏度；③商業(yè)來源試劑的滴度；④與*抗體相互作用的特異性。
一、二級(jí)試劑產(chǎn)生的背景
在任何試驗(yàn)中由二級(jí)試劑引起的背景問題可以設(shè)立不加*抗體的對(duì)照評(píng)估。*的二級(jí)試劑在無*抗體存在時(shí)應(yīng)不產(chǎn)生可檢測(cè)的信號(hào)。實(shí)際上，很少能獲得這種理想的結(jié)果，但一個(gè)良好的二級(jí)試劑本身所產(chǎn)生的背景應(yīng)當(dāng)相當(dāng)?shù)汀?br /> 長(zhǎng)期存放的二級(jí)試劑常發(fā)生凝聚或變性，所以連續(xù)監(jiān)測(cè)背景就顯得特別重要，這不僅在評(píng)價(jià)有效的商用二級(jí)試劑時(shí)極為重要，在實(shí)驗(yàn)中也應(yīng)作為常規(guī)要求。這對(duì)細(xì)胞和組織免疫染色特別適合，因此在每一次試驗(yàn)中，應(yīng)將不加*抗體作為對(duì)照。
二、商業(yè)來源試劑的靈敏度
二級(jí)試劑的靈敏度取決于兩方面的因素，即選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物及熟悉的偶聯(lián)技術(shù)。應(yīng)通過比較不同的商業(yè)貨源測(cè)試第二試劑標(biāo)記的偶聯(lián)效果。
從不同的公司購買數(shù)批有效的二級(jí)試劑，并在相同的實(shí)驗(yàn)室條件下做對(duì)比試驗(yàn)，此類試驗(yàn)應(yīng)該穩(wěn)定可靠，容易重復(fù)。盡量從不同的公司選擇合適的供應(yīng)批次，通過鑒定證實(shí)一批好試劑后，應(yīng)根據(jù)需要購買，并留少量樣品作為下次試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)。一旦選定較好的批號(hào)，應(yīng)與廠商保持。
三、商業(yè)來源試劑的滴度
分析不同廠商的產(chǎn)品需考慮的一個(gè)重要因素是使用該試劑的有效滴度，例如1mg標(biāo)記抗體的成本在不同的廠家差異很大。某些商業(yè)化抗體，雖然其單位重量成本較高，但一般可作10倍稀釋后使用，故此類試劑更具有應(yīng)用價(jià)值。
此外，使用較高稀釋倍數(shù)的二級(jí)試劑可產(chǎn)生更清晰的背景。因此，應(yīng)選擇能在較低滴度使用的二級(jí)試劑。所有的稀釋一定要使用含蛋白的緩沖液，例如含3％BSA的PBS，低濃度蛋白有變性的傾向，增加了非特異性相互作用的可能性，抵消了高倍稀釋的優(yōu)勢(shì)。
四、特異性
影響選擇二級(jí)試劑的zui后一個(gè)因素是其識(shí)別*抗體的特異性。如果需要在含有其他競(jìng)爭(zhēng)性的蛋白中識(shí)別*抗體時(shí)，測(cè)定交叉反應(yīng)極為重要。zui常見的情況是免疫染色樣本中含有來自宿主器官的抗體，或是雙抗體標(biāo)記的熒光試驗(yàn)
