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利什曼原蟲抗體(Leishimaria Ab)ELISA試劑盒
僅供體外研究使用,不用于臨床診斷!
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人利什曼原蟲抗體(Leishimaria Ab)的含量。
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
[實驗原理]
試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人利什曼原蟲抗體(Leishimaria Ab)捕獲抗原的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人利什曼原蟲抗體(Leishimaria Ab)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
[樣本處理及要求]
1. 血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織*碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標本溶血會影響檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
[需要而未提供的試劑和器材]
1.酶標儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水
[試劑盒組成]
利什曼原蟲,一種微小的鞭毛蟲,在動質(zhì)體目錐體蟲科動物中占據(jù)著特殊的地位。這種原蟲主要寄生于哺乳動物、爬行類等動物體內(nèi),給宿主帶來一系列健康問題。在醫(yī)學領(lǐng)域,利什曼原蟲引發(fā)的疾病統(tǒng)稱為利什曼病,其分布廣泛,影響深遠。
利什曼原蟲的種類繁多,其中寄生于人體的主要有三種,其中杜氏利什曼原蟲的危害尤為嚴重。這種原蟲主要寄生于人體的肝、脾、淋巴腺等細胞之內(nèi),通過其微小的鞭毛在細胞內(nèi)移動并繁殖。當人體被感染后,會引發(fā)黑熱病,這是一種嚴重的疾病,患者會出現(xiàn)發(fā)熱、肝脾腫大、貧血等癥狀。如果不及時治療,死亡率高達90%以上,是
我國五大寄生蟲病之一。
利什曼病的傳播主要依賴于特定的媒介,如白蛉子。這些吸血的小昆蟲在吸食了帶有利什曼原蟲的動物血液后,原蟲會在其體內(nèi)繁殖形成細滴蟲。當白蛉子再次吸食人血時,細滴蟲就會被接種到人體內(nèi),使人感染。此外,病犬也是利什曼病的重要傳播源,因此,在疫區(qū),消滅病狗也是預(yù)防利什曼病的重要手段之一。
利什曼病在全球范圍內(nèi)的分布廣泛,主要流行于非洲、亞洲、歐洲南部和南美洲等地。在我國,皮膚利什曼病最早發(fā)現(xiàn)于20世紀80年代,新疆和中國臺灣*病例報道,患者以青壯年為多。隨著全球化的推進和氣候變化的影響,利什曼病的傳播范圍也在不斷擴大,對全球公共衛(wèi)生構(gòu)成了嚴重威脅。
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