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酵母雙雜交服務

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更新時間：2023-10-17 17:21:35瀏覽次數(shù)：377次

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泰克生物科技（天津）有限公司

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產(chǎn)品簡介

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泰克生物（Tek Biotech）的酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid system，Y2H）是由基于SMART法構建的文庫、酵母菌株、嚴謹?shù)膱蟾婊?、高表達載體組成的。

詳細介紹

泰克生物（Tek Biotech）經(jīng)過多年的發(fā)展，積累了豐富的免疫學研究與檢測經(jīng)驗，建立了完善的分子基礎實驗室平臺。泰克生物（Tek Biotech）的酵母雙雜交系統(tǒng)（Yeast two-hybrid system，Y2H）是由基于SMART法構建的文庫、酵母菌株、嚴謹?shù)膱蟾婊?、高表達載體組成的。

酵母雙雜交系統(tǒng)是一種在基因水平上使用遺傳和分子方法來檢測蛋白質之間相互作用的免疫學測試技術。這種方法只需要構建質粒，沒有涉及蛋白純化和抗體免疫階段，同時又能方便快速地獲得相互作用的蛋白質的編碼基因。Y2H可以用來篩選與靶蛋白相互作用的蛋白基因序列，也可以研究已知蛋白間的相互作用原理。

泰克生物（Tek Biotech）既能夠提供蛋白互作檢測服務，包括免疫共沉淀（Co-IP）、Pull-down等實驗，實現(xiàn)對蛋白，小分子，抗體等相互作用的定性定量分析；也能進行ELISA、Western Blot等常用的免疫學檢測技術。

酵母雙雜交系統(tǒng)（Y2H）的原理：

酵母雙雜交系統(tǒng)原理-KMD Bioscience1.png

圖1 酵母雙雜交系統(tǒng)原理

DNA結合域（Bonding Domain, BD）: BD是一種能夠與特定的DNA分子序列結合從而調節(jié)基因表達和自我復制的蛋白質結構域。DNA BD存在于轉錄因子等許多基因調控元件中，賦予這些調控元件識別并結合特定DNA序列的功能，從而達到對下游基因調控的目的。

轉錄因子激活域（Activation Domain，AD）：AD是一段能夠在在轉錄過程中激活基因轉錄的功能性蛋白質序列，常存在于轉錄因子蛋白質中。AD可以通過與其他調控因子的相互作用形成蛋白質復合物（轉錄因子、共激活因子和基因調控復合物等），從而使轉錄因子獲得可以結合到DNA特定序列，然后招募其他轉錄因子和RNA聚合酶來啟動轉錄的功能。因為每個轉錄因子只能結合到特定的序列上，所以這個過程是高度特異性的。

在酵母雙雜交系統(tǒng)中，將DNA BD和轉錄因子AD分別與Bait蛋白X融合和Prey蛋白Y形成融合蛋白。BD-Bait X融合蛋白可以識別并結合報告基因的上游激活子序列（Upstream Activation Sequence, UAS）。同時如果Bait X蛋白與Prey Y蛋白之間具有相互作用，這會使DNA AD與轉錄因子BD重新結合構成具有啟動報告基因功能的結構域。

酵母雙雜交及系統(tǒng)是一種在細胞核中進行利用基因水平技術來鑒定和檢測細胞核和細胞質蛋白之間相互作用的方法。同時，Y2H也可以使用蛋白質作為誘餌從所需的細胞類型、組織或整個生物體制備的蛋白質片段庫來進行篩選，然后通過對所選酵母菌菌落中相應的質粒進行測序，從而確定相互作用。Y2H是在真核生物酵母中進行的，具有靈敏性高、功能強大、適用范圍廣等特點，現(xiàn)已被應用于多個研究領域。

酵母雜交檢測服務的分類：

為了研究蛋白質的相互作用，科學家根據(jù)傳統(tǒng)的Y2H系統(tǒng)，開發(fā)了幾種系統(tǒng)以適應不同蛋白質的不同亞細胞定位和生化特征。泰克生物（Tek Biotech）為客戶提供多種系統(tǒng)的服務，以適應不同項目的不同需求。

（1）酵母單雜系統(tǒng)（Yeast one-hybrid system，Y1H）：研究蛋白質-DNA相互作用。

酵母單雜交系統(tǒng)原理-KMD Bioscience2.png

圖2 酵母單雜交系統(tǒng)原理

酵母單雜交系統(tǒng)需要將Bait DNA序列整合到酵母基因序列中。將Prey蛋白構建到AD載體中，與轉錄因子GAL4的AD結構域融合表達。如果Prey蛋白能夠識別并結合Bait DNA序列，Prey蛋白所融合表達的AD結構域就可以招募轉錄復合物以激活報告基因的表達。

（2）酵母三雜交系統(tǒng)（Yeast three-hybrid system，Y3H）：研究兩個蛋白質和第三成分（蛋白、RNA或小分子）間的相互作用。

酵母三雜交系統(tǒng)原理-KMD Bioscience3.png

圖3 酵母三雜交系統(tǒng)原理

在酵母三雜交系統(tǒng)中，將兩個RNA結合蛋白X，Y分別于DNA BD和轉錄因子AD結合形成兩個融合蛋白。第三種成分可以為這兩個RNA結合蛋白X，Y提供兩個特定的RNA靶點來連接兩個融合蛋白。

（3）膜酵母雙雜交系統(tǒng)（Membrane yeast two-hybrid system，Mb Y2H）：用于研究膜蛋白

膜酵母雙雜交系統(tǒng)原理-KMD Bioscience4.png

圖4 膜酵母雙雜交系統(tǒng)原理

泛素（Ub）是一種蛋白質，可以通過實驗被分離成兩個基團，并且當它們靠近彼此時，其功能又可以進行重構。

在Mb Y2H系統(tǒng)中，將目標膜蛋白Bait融合到半個泛素（Cub，泛素分子被截斷后的C端）上，并且Cub上還連有一個含有人工轉錄因子（TF），該TF由細菌LexA-DNA BD和單純皰疹病毒VP16蛋白AD組成。將另一種目標蛋白Prey（膜蛋白或細胞質蛋白）融合到另外半個改造泛素（NubG/NubA，是將泛素分子被截斷后的N端進行改造，從而降低Cub與Nub兩者之間的親和性，避免其發(fā)生自發(fā)重組現(xiàn)象）上。所以只有當結合在NubG/A的蛋白質和結合在Cub的蛋白質間相互作用時，才能使兩個半個泛素分子結合形成可以被泛素特異性蛋白酶（UBPs）識別作用的完整泛素分子。然后在酶的作用下，連接在Cub的調控因子被釋放進入細胞核中，從而結合在特定的DNA序列上來激活轉錄報告基因。

服務優(yōu)勢：

-- 技術專家直接服務，滿足不同檢測需要

-- 高準確度分析儀器，經(jīng)驗豐富的操作以及嚴格的質量管理，保證結果準確可靠

-- 檢測服務效率高，過程實時監(jiān)控

-- 檢測儀器靈敏度高，樣品消耗量低

-- 實驗周期短，節(jié)省等待時間

-- 提供真正的一站式服務：從構建文庫到陽性克隆的篩選，這樣可提高效率，避免錯誤，從而為客戶從客觀上節(jié)省費用

服務內容

服務流程	內容	周期
客戶提供	不少于2 μg的質粒（含誘餌靶基因）以及該基因的DNA序列，以便我們設計合成方案，進行人工合成（需收費）	***
創(chuàng)建BD-X誘餌	將誘餌靶基因連接到Y2H載體中去，并測序；誘餌靶基因可以是一段基因（酶切）或全長基因	6-8周
通過BD-X誘餌測試自我激活	測試誘餌基因的自我激活能力和毒性
酵母雙雜交篩選并獲得識別獵物	文庫篩選和交互驗證，陽性克隆的分離提取和DNA的測序
交付	陽性克隆若干及DNA測序結果，每個陽性克隆不少于2 μg質粒