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泰克生物科技(天津)有限公司
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更新時(shí)間:2023-10-17 17:21:35瀏覽次數(shù):292次
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近年來隨著mRNA合成、化學(xué)修飾mRNA和遞送技術(shù)的發(fā)展,mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率大幅提高,免疫原性逐步可控,其在腫瘤領(lǐng)域顯示了巨大的商業(yè)價(jià)值。
近年來隨著mRNA合成、化學(xué)修飾mRNA和遞送技術(shù)的發(fā)展,mRNA穩(wěn)定性和翻譯效率大幅提高,免疫原性逐步可控,其在腫瘤領(lǐng)域顯示了巨大的商業(yè)價(jià)值。mRNA技術(shù)產(chǎn)品是基于mRNA指導(dǎo)蛋白合成的“中心法則",在體外設(shè)計(jì)合成含有編碼特定抗原的mRNA序列,經(jīng)過序列優(yōu)化、化學(xué)修飾和純化等加工,采用不同方式遞送至人體細(xì)胞,利用機(jī)體細(xì)胞翻譯產(chǎn)生蛋白、誘導(dǎo)免疫應(yīng)答、補(bǔ)充機(jī)體蛋白、調(diào)節(jié)免疫等作用,從而預(yù)防或治療疾病。人類90%以上的疾病與蛋白質(zhì)相關(guān),基于mRNA特性,mRNA技術(shù)在預(yù)防與治療疾病方面前景廣闊。
Fig1 mRNA 免疫
泰克生物能夠?yàn)榭蛻籼峁┒喾N抗原(包括但不限于PTM蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、分泌蛋白)的mRNA免疫抗體制備服務(wù),此外,泰克生物擁有包括從基因合成與修飾、AAV載體構(gòu)建、動(dòng)物免疫、雜交瘤細(xì)胞的融合與篩選、抗體生產(chǎn)等一站式技術(shù)服務(wù),并且有配套的抗原抗體結(jié)合分析、抗原抗體BLI親和力測(cè)定、抗體細(xì)胞系驗(yàn)證、等許多下游配套服務(wù),為客戶的抗體藥研發(fā)與生產(chǎn)提供有力的支撐。
█ mRNA的免疫原性
純化的mRNA僅包含單鏈RNA (single-stranded RNA, ssRNA)分子,通過遞送系統(tǒng)包裹并以內(nèi)吞方式進(jìn)入核內(nèi)體,進(jìn)入核內(nèi)體后mRNA從遞送系統(tǒng)中釋放出來并被定位在膜上的Toll樣受體(Toll-like receptor, TLR))7和TLR-8識(shí)別,導(dǎo)致下游的髓樣分化標(biāo)記物88 (myeloid differentiation marker 88, MyD88)被激活,引起I型干擾素(interferon, IFN)激活和炎癥因子的分泌。
█ mRNA疫苗制備過程
1. 制備IVT mRNA:抗原選擇、線性DNA模板合成、體外轉(zhuǎn)錄和mRNA純化。在對(duì)病原體的基因組進(jìn)行測(cè)序后選擇目標(biāo)抗原時(shí),將其插入質(zhì)粒 DNA 模板中。生產(chǎn) DNA 模板應(yīng)包含抗原序列、5′和3′ UTR以及5′UTR上游的T7啟動(dòng)子。體外轉(zhuǎn)錄過程需要 DNA 模板、修飾或未修飾的核苷和 T7 RNA 聚合酶。
2. mRNA進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)需要借助載體,mRNA疫苗的遞送載體包括病毒載體和非病毒載體兩種:病毒載體以慢病毒、腺病毒相關(guān)病毒和仙臺(tái)病毒等為主,病毒載體在進(jìn)行核酸遞送的同時(shí)也可能會(huì)引起免疫反應(yīng),從而影響疫苗的效果,非病毒載體主要包括脂質(zhì)體、樹突狀細(xì)胞(dendritic cell, DC)、無機(jī)納米粒子、陽離子細(xì)胞穿膜肽等。
█ mRNA遞送系統(tǒng)
1.裸mRNA直接注射法:直接注射至組織中,通常使用蔗糖、海藻糖溶液等緩沖液對(duì)mRNA進(jìn)行一定的稀釋處理。優(yōu)點(diǎn)是成本低、方便快捷、缺點(diǎn)是mRNA極易被RNA酶降解,且難以穿過細(xì)胞膜。
2.體外DC負(fù)載:將mRNA離體加載或電穿孔入樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs),體外負(fù)載樹突狀細(xì)胞有利于抗原呈遞細(xì)胞的有效靶向。
3.陽離子納米乳:一種基于水包油的遞送方式,由角鯊烯和表面活性劑如吐溫、生育酚等組成,MF59和AS03是2種水包油乳劑佐劑,應(yīng)用于2009年的流感疫苗研究中。
█ mRNA藥物優(yōu)勢(shì)
(1)易在體外生產(chǎn)和純化,除去蛋白藥物及病毒載體制備的復(fù)雜過程,同時(shí)可避免宿主蛋白及病毒源性污染;
(2)IVT mRNA的生產(chǎn)工藝通用性強(qiáng),可以快速應(yīng)用于生產(chǎn)不同的目的蛋白,節(jié)省藥物研發(fā)時(shí)間,提高效率;
(3)mRNA僅需進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)即可翻譯成蛋白質(zhì),無需進(jìn)入細(xì)胞核,因此不存在基因的插入和整合,提高藥物的安全性;
(4)通過調(diào)節(jié)序列修飾和遞送載體可以改變其半衰期;
█ mRNA免疫服務(wù)流程
服務(wù)項(xiàng)目 | 內(nèi)容 | 周期 |
mRNA合成 | mRNA合成、修飾與組裝 | 4-6周 |
動(dòng)物免疫 | 皮下多點(diǎn)注射,標(biāo)準(zhǔn)免疫流程,ELISA測(cè)血清效價(jià) | 10周 |
融合與篩選 | 脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合,ELISA篩選陽性克隆,擴(kuò)增 | 4-6周 |
抗體生產(chǎn) | 雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn),抗體純化 | 可選 |
█ 服務(wù)優(yōu)勢(shì)
? 無需重組蛋白或多肽,省時(shí)省力
? 無抗原污染風(fēng)險(xiǎn)
? 生成具有高親和力和特異性的抗體
? 陽性的雜交瘤細(xì)胞株3-5株(小鼠單抗)
? 可提供抗體人源化服務(wù)并獲得的與原抗體具有相同的親和力的人源化抗體
? 可提供一系列抗體體外驗(yàn)證服務(wù)
? 從基因合成與修飾、AAV載體構(gòu)建、動(dòng)物免疫、雜交瘤細(xì)胞的融合與篩選、抗體生產(chǎn)等一站式技術(shù)服務(wù)
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