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南京江苑生物科技有限公司


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慢病毒包裝質(zhì)粒Mix

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參  考  價:1200 - 3000
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 產(chǎn)品型號

    JY03024

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    經(jīng)銷商

  • 所在地

    南京市

規(guī)格

JY03024-100ug 1200元 1000件可售

JY03025-200ug 2000元 1000件可售

JY03026-300ug 3000元 1000件可售

聯(lián)系方式:楊先生查看聯(lián)系方式

更新時間:2022-08-14 22:42:57瀏覽次數(shù):661次

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經(jīng)營模式:經(jīng)銷商

商鋪產(chǎn)品:26條

所在地區(qū):江蘇南京市

聯(lián)系人:楊先生 (銷售)

產(chǎn)品簡介
產(chǎn)地 國產(chǎn) 規(guī)格 100ug
級別 其他 保存條件 -20℃保存

慢病毒包裝質(zhì)粒Mix 江苑生物的慢病毒包裝質(zhì)粒Mix(Packaging Mix)為優(yōu)化的全套慢病毒包裝輔助質(zhì)?;旌衔?,可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統(tǒng)

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品簡介

江苑生物的慢病毒包裝質(zhì)粒MixPackaging Mix)為優(yōu)化的全套慢病毒包裝輔助質(zhì)?;旌衔铮梢约嫒莸诙偷谌穆《景b系統(tǒng)。本產(chǎn)品附贈表達(dá)eGFP蛋白的對照質(zhì)粒(eGFP Control),用于驗證慢病毒包裝效果。本公司還提供慢病毒包裝試劑盒(江苑生物 JY03021),包含全套的包裝組分和試劑。

Packaging Mix能夠表達(dá)病毒包裝需要的各種必需成分如:gag基因,編碼病毒的核心蛋白如基質(zhì)蛋白、衣殼蛋白和核衣殼蛋白等;pol基因,編碼病毒復(fù)制所需的酶如反轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶;rev基因,編碼調(diào)節(jié)gagpol基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子;還含有單純皰疹病毒來源的VSV-G基因,提供病毒包裝所需要的包膜蛋白。江苑生物的慢病毒包裝系統(tǒng)產(chǎn)生的慢病毒為“自啥"性病毒,即病毒感染目的細(xì)胞后不會再感染其他細(xì)胞,也不會利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒。慢病毒中的毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒。

本產(chǎn)品具有慢病毒包裝時間周期短(一周之內(nèi)即可獲得純化好的高滴度慢病毒)和病毒滴度高的優(yōu)勢,可應(yīng)用于針對不同基因和藥物靶標(biāo)的細(xì)胞學(xué)實驗和整體動物實驗。非常適合于病毒包裝初試者。為了加速科研進(jìn)程,江苑生物還提供細(xì)胞基因過表達(dá)、shRNA/siRNA介導(dǎo)的基因沉默、CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因敲除等服務(wù)。

產(chǎn)品組分

組分名稱

儲存

產(chǎn)品貨號/規(guī)格

JY03024

JY03025

JY03026

Packaging Mix

-20℃

100 μg (10 Tests)

200 μg (20 Tests)

400 μg (40 Tests)

eGFP Control

-20℃

10 μg

10 μg

10 μg

保存條件

干冰運輸。-20℃保存, 避免反復(fù)凍融,1年有效。

還需準(zhǔn)備的其他實驗材料

1.被包裝的慢病毒載體質(zhì)粒:在慢病毒包裝前,需要先獲得含有目的序列的慢病毒載體,以無內(nèi)毒素高純度的試劑盒提取慢病毒載體質(zhì)粒,并將質(zhì)粒DNA溶于無菌的TEddH2O中,測定其濃度及純度,保證質(zhì)粒DNA A260/A2801.8-2.0之間。

2.慢病毒包裝用293T細(xì)胞株:良好的細(xì)胞狀態(tài)對病毒的包裝至關(guān)重要,避免細(xì)胞培養(yǎng)基有細(xì)菌、真菌或支原體的污染,盡量使用傳代次數(shù)較少的細(xì)胞,如果細(xì)胞是剛復(fù)蘇的話,傳兩代之后再包裝。

3.細(xì)胞培養(yǎng)基,血清和雙抗等

4.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑

5.其他常用實驗耗材(如10 cm培養(yǎng)皿,離心管等)

使用說明10 cm培養(yǎng)皿,為例):

1293T細(xì)胞分盤:轉(zhuǎn)染前一天,將293T細(xì)胞以合適的比例傳代到10 cm培養(yǎng)皿中,當(dāng)細(xì)胞長到70%-90%時準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染。

注:細(xì)胞要充分消化,成團(tuán)細(xì)胞影響轉(zhuǎn)染效率。

2轉(zhuǎn)染前換液:轉(zhuǎn)染前將293T細(xì)胞換成新鮮培養(yǎng)基,10 mL/10 cm皿?,F(xiàn)在的轉(zhuǎn)染試劑例如Lipofectamine 2000、Lipofectamine 3000、LipoSuper(江苑生物 JY03051)和其他轉(zhuǎn)染試劑,多不受血清和抗生素的影響,此處可換為含有血清和抗生素的*培養(yǎng)基。具體需根據(jù)轉(zhuǎn)染試劑的要求換液。

注:293T細(xì)胞貼壁性不是很好,換液時應(yīng)小心滴加盡量避免沖起細(xì)胞。

3.轉(zhuǎn)染:Packaging Mix表達(dá)目的序列的慢病毒載體質(zhì)粒=11

以使用LipoSuper(江苑生物 JY03051)轉(zhuǎn)染試劑為例:

取一只無菌的離心管,加入750 μL DMEM(不含血清和抗生素),10 μg表達(dá)目的序列的慢病毒載體質(zhì)粒(自行提供),和13.5 μL Packaging Mix10 μg,用槍輕輕吹打混勻;再加入24 μL LipoSuper,用槍輕輕吹打混勻,靜置5 min,請?zhí)貏e注意不可Vortex或離心。將混合液均勻滴加到提前換液的細(xì)胞培養(yǎng)基中,輕輕晃勻,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),后續(xù)無需在數(shù)小時后更換培養(yǎng)液。

DMEM

750 μL

表達(dá)目的基因慢病毒載體質(zhì)粒

(或者eGFP Control,作為對照)

10 μg

(eGFP Control 10 μg)

Packaging Mix

13.5   μL

LipoSuper

32 μL

注:上述混合液室溫存放6 h內(nèi)穩(wěn)定。

某些細(xì)胞對轉(zhuǎn)染試劑比較敏感,可以在轉(zhuǎn)染后8-12小時更換細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)染效率無顯著影響。

以使用Lipofectamine 3000Invitrogen L3000015)轉(zhuǎn)染試劑為例:

取兩只無菌的離心管,一只加入500 μL Opti-MEM32 μL Lipofectamine 3000,用槍輕輕吹打混勻;另一只加入500 μL Opti-MEM 10 μg表達(dá)目的序列的慢病毒載體質(zhì)粒(自行提供)13.5 μL Packaging Mix10 μg40 μL P3000試劑,用槍輕輕吹打混勻。將兩管液體混合,再次用槍輕輕吹打混勻,不可Vortex或離心,室溫孵育10-15 min。將混合液均勻滴加到提前換液的細(xì)胞培養(yǎng)基中,輕輕晃勻,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),后續(xù)無需在數(shù)小時后更換培養(yǎng)液。

Opti-MEM

500 μL

Lipofectamine 3000

32 μL

二管

Opti-MEM

500 μL

表達(dá)目的基因慢病毒載體質(zhì)粒

(或者eGFP Control,作為對照)

10 μg

(eGFP Control 10 μg)

Packaging Mix

13.5   μL

P3000

40 μL

注:某些細(xì)胞對轉(zhuǎn)染試劑比較敏感,可以在轉(zhuǎn)染后8-12小時更換細(xì)胞培養(yǎng)液。

InvitrogenProtocol顯示10 cm培養(yǎng)皿Lipofectamine 3000推薦使用21.7 μL或者43.4 μL兩種劑量,自行探索哪個劑量更為合適。本實驗室在檢測該包裝質(zhì)粒時,選用的劑量為32 μL

4.病毒收集:轉(zhuǎn)染36 h左右后,吸取上清至新的離心管中,4保存。另外添加10 mL新鮮的*培養(yǎng)基到細(xì)胞中,注意不要沖起細(xì)胞。再次大約36 h后,收取上清至同一個離心管中。將兩次收集的上清用0.45 μm濾器過濾后轉(zhuǎn)移到新的離心管中(若沒有0.45 μm濾器,將上清3000 rpm4 ℃離心5 min,棄沉淀亦可)。此時上清液中的病毒顆??梢灾苯訖z測滴度或者感染目的細(xì)胞,如果對病毒的滴度及純度有較高要求,可對上清液進(jìn)行濃縮與純化。

注:如果使用濾器過濾,只能使用低蛋白結(jié)合力的纖維素醋酸酯或聚醚砜(PES)膜,不能用硝酸纖維素膜(NC)。

5.(可選)慢病毒濃縮:可以使用江苑生物的慢病毒濃縮試劑盒(JY03011進(jìn)行慢病毒濃縮,效率更高。同時,也可以自行配制PEG-8000慢病毒濃縮液濃縮慢病毒。

注:慢病毒滴度測定方法參考(江苑生物網(wǎng)站新聞中心)

6.病毒分裝與保存:將病毒上清或濃縮后的病毒分裝,保存于-80℃。

注:病毒液一定要分裝,切忌反復(fù)凍融,凍融一次病毒滴度將降低20-60%。


注意事項

1.廢棄的含病毒的培養(yǎng)基中加入84消毒液(1:20左右),浸泡1天后丟棄。接觸過病毒的槍頭,離心管,培養(yǎng)板等其他物品可用84消毒液稀釋液處理,也可以用煮沸處理半小時或常規(guī)滅菌(121℃,20 min)。

2.本產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究。

3.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。


關(guān)鍵詞:培養(yǎng)皿 離心管

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